Фенотипи знайти в RNAi екран

На цьому слайді показані деякі мутантні фенотипи знайдені на екрані RNAi з ORF, на хромосомі III в C. Елеганс. Ці приклади включають в себе мутантів, у яких (б) пронуклеусов (показані стрілками на дикого типу зліва) не є очевидними, (г) пронуклеусов не мігрують правильно, і (е) цітокінеза не прогресує у звичайному режимі.

40. RNAi екрану ембріональних генів

Microarray аналіз виявлених генів активні в ранньому ембріогенезі

Старі RNAi цільової кожного гена

Хробаки ін'єкції РНК-інтерференції конструкція

Нащадки перевірені на фенотипи

В іншому екрані RNAi, цілі були гени, які були визначені за допомогою мікрочіпів, оскільки активні в яєчнику в C. Елеганс. RNAi конструкції були зроблені для кожного з цих генів і вводять в черв'яків. Фенотипический аналіз потомства включали створення відео подій клітинного поділу. Багато генів, які зачіпають раннього поділу клітин в ембріоні хробака були визначені таким чином.

43. Виявлення генів в бібліотеках мутантів

Мета: знайти відомих генів порушується в колекції мутантів

Скринінг функціональної геноміки-бібліотеки

Може бути використаний для мутацій, які впливають на смертність і народжуваність

екран гетерозигот

Можна використовувати ПЛР для виявлення мутацій зокрема генів або послідовностей фланкуючі послідовності всіх вставками

Інший зворотної генетики підхід полягає у виявленні мутацій в гені інтересу до бібліотек мутантів. Цей метод є еквівалентом скринінгу функціональної геноміки бібліотеки. Це особливо доречно, коли мутація призводить до летальності або втрату родючості, тому що скринінг зазвичай виконується на гетерозигот. Найбільш поширеним засобом скринінгу бібліотек полягає у використанні ПЛР. Зовсім недавно дослідники були секвенування регіонів флангові всі вставлені ДНК в колекцію вставки мутантів. Після того, послідовності зберігаються в базі даних, скринінг може бути зроблено шляхом пошуку в базі даних фланкуючі послідовності з метою виявлення той, який відповідає цікавить гена.

44. Скринінг вставки бібліотеки

ПЛР використовується для пошуку вставка

Один праймера, комплементарного для вставки

Інші праймера, комплементарного гена

Якщо отримати продукт ампліфікації, то у вас є вставка

Послідовність продукт для точного місцеположення

ПЛР часто використовується для скринінгу колекції організмів, які були мутагенезу допомогою введення транспозона, або Т-ДНК. Один грунтовки проводиться, що є доповненням до ДНК використовується для інсерційного мутагенезу. Інший праймер є доповненням до цікавлячого гена. Виявлення продукту ампліфікації вказує, що є вставки в геном. Продукт ПЛР можуть бути впорядковані, щоб визначити точну точку вставки в геном.

Дата добавления: 2014-01-05