Результаты исследования. Материалы и методы исследования

Материалы и методы исследования.

В качестве субстрата для реакции использовалась гиалуроновая кислота полученная по методу, предложенному РНИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. Стандартизация полученного препарата гиалуроновой кислоты осуществлялась по оптической плотности. Использовался препарат с оптической плотностью сгустка 0,85 – 1,05.

Определение гиалуронидазной активности основано на образовании сгустка риванола с гиалуроновой кислотой обратно пропорционально деполимиризации последней под действием гиалуронидазной активности различного происхождения.

При постановке реакции готовится последовательное разведение сывороток крови. Мы использовали двукратные разведения сыворотки от 1/1000 до 1/16000. К каждому разведению сывороток последовательно добавляется 0,1 мл 0,004 М рН 3,8 ацетатного буфера, содержащего 0,15 М раствор хлорида натрия и 0,2 мл препарата гиалуроновой кислоты. В качестве контроля использовался 0,9% раствор NaCl. Постановка реакции осуществляется в пробирках в дублях. После часовой инкубации при температуре 37 ⁰С в каждую из пробирок добавляется 20 мкл 0,75% риванола.

Результат оценивался по образованию сгустка в баллах, где 0 – это плотный сгусток (отсутствие активности), 1 – рыхлый сгусток, 2 – рыхлый сгусток, хлопья, нити, 3 – хлопья, нити, 4 – хлопья, 5 – полный распад сгустка (максимальная активность).

Учитывая, что в контроле уровень активности равнялся 0-1 баллу, то минимальная активность сыворотки крови равна двум баллам и выше.

Исследуемую группу составили 9 пациентов.

Статистическая обработка данных проводилась в пакете программ Statistica 7.

В проведенных нами ранее исследованиях на 30 пациентах было установленно, что у всех пациентов с циррозом печени и хроническим гепатитом максимальный титр сыворотки, в котором определяется гиалуронидазная активность (1/8000 – 1/16000) в 2-4 раза превышает максимальный титр сыворотки в группе доноров (1/4000) [7].

Следующим этапом нашего исследования стала оценка динамики гиалуронидазной активности на фоне стандартного лечения (согласно протокола МЗ РБ). Для оценки динамики гиалуронидазная активность сыворотки крови определялась в первый день после поступления на стационарное лечение и на 7 день лечения. Полученные результаты представленны в таблице 2:

Таблица 2 – Динамика изменения гиалуронидазной активности в баллах на фоне лечения согласно протоколам МЗ РБ

Группы пациентов, № 9	1/1000	1/2000	1/4000	1/8000	1/16000	Достоверность различий, р
До лечения	4,11	3,50	3,44	2,94	2,89	<0,044
На 7 день после начала лечения	3,8	3,3	2,8	2,4	2,2
Достоверность различий, р			<0,046	<0,05	<0,026

Уровень гиалуронидазной активности сыворотки крови пациентов на 7 день после начала лечения оставался выше уровня активности сыворотки крови группы доноров. Титр сыворотки в котором определялась исследуемая активность как до, так и на 7 день после начала лечения равнялся 1/16000. Однако, величина риванолового сгустка на 7 день после лечения достоверно ниже, чем до начала лечения как в целом в группе (р<0,044), так и по отдельным разведениям сыворотки.

Выводы:

7. Уровень гиалуронидазной активности сыворотки крови пациентов на 7 день после начала лечения оставался выше уровня активности сыворотки крови группы доноров.

8. Величина риванолового сгустка на 7 день после лечения достоверно ниже, чем до начала лечения как в целом в группе (р<0,044), так и по отдельным разведениям сыворотки.

Литература:

3. Bin Gao Alcoholic Liver Disease: Pathogenesis and New Therapeutic Targets / Bin Gao, Ramon Bataller // Gastroenterology Volume 141, Issue 5, November 2011, Pages 1572–1585

4. Радченко В.Г. Основы клинической гепатологии. Заболевания печени и билиарной системы / Радченко В.Г. и соавт. // СПб.: «Диалект», 2005г. – 864 с.

5. Клинические рекомендации. Гастроэнтерология / под. ред. В.Т.Ивашкина //М.: ГЭОТАР-Медиа, 208. – 208с.

6. Massimo Pinzania. Liver cirrhosis / Massimo Pinzania and oth. // Best Practice & Research Clinical Gastroenterology Vol. 25, Issue 2, April 2011, Pages 281–290.

7. Karin Zimmermann. Inhibition of hyaluronidase by dextransulfate and its possible application in anticancer treatment / K. Zimmermann and oth. // Journal of Cancer Research and Clinical Oncology, 1983, Volume 105, Number 2, p.189-190.

8. Meyer K. Hyaluronidases. / K. Meyer // The Enzimes, Vol. 5 // NY: Academic Press, 1971 — pp. 307—320.

9. Прищепенко В.А. Активность гиалуронидазы сыворотки крови больных циррозом печени / Прищепенко О.А., Прищепенко В.А. // «Студенческая медицинская наука XXI века посвященная 80-летию образования ВГМУ» материалы ХIV международной научно-практической конференции, ВИТЕБСК: ВГМУ 2014 г.

Дата добавления: 2015-05-08