Выделение муцина из слюны и открытие в нем углеводного компонента

Лабораторная работа №5

Указания к оформлению лабораторной работы

V Обнаружение фосфата в казеиногене.

V Выделение казеиногена из молока.

Ход работы

К 2 мл молока приливают равный объем дистиллированной воды. Осаждают казеиноген добавлением 1 капли концентрированной уксусной кислоты. Не следует добавлять избыток кислоты, поскольку молекулы белка казеиногена перезаряжаются и вновь переходят в раствор, что мешает осаждению. Выпавший осадок казеиногена отфильтровывают и промывают на фильтре дистиллированной водой 2 раза. Часть осадка снимают с фильтра стеклянной палочкой и проводят с ним цветные реакции на белки (биуретовую, Фоля, Милона).

В пробирку вносят 0,1г сухого порошка казеина, прибавляют 5 мл 10% раствора гидроксида натрия и ставят в кипящую водяную баню на 30 мин. Охлаждают пробирку и проводят реакцию на продукты гидролиза.

А. Обнаружение белка. Проводят реакцию 10 капель гидролизата и проводят реакцию с биуретовым реактивом, добавляя 3-5 капель его к 10 каплям гидролизата (см. лаб. № 2). Отмечают появление характерного окрашивания.

Б. Обнаружение фосфата. В другую пробирку вносят 20 капель гидролизата и нейтрализуют его, прибавляя по каплям концентрированную азотную кислоту до слабокислой реакции по лакмусовой бумаге. Затем прибавляют 10 капель раствора молибдата аммония, перемешивают содержимое и приливают 10 капель 1% раствора аскорбиновой кислоты, приготовленной на 1М растворе соляной кислоты. Вновь перемешивают, оставляют стоять пробы до развития синего окрашивания и записывают химизм реакции.

Н₃РО₄+12(NH₄)₂МоО₄+21НNО₃→(NН₃)3(РО4•12МоО₃)+21N₄NО₃+12Н₂О

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, принцип метода, химизм реакций и сделайте выводы о составе и растворимости сложного белка молока – казеиногена.

Контрольные вопросы

1. Назовите простетическую группу казеиногена молока.

2. Почему в кислом молоке казеиноген выпадает в осадок и молоко створаживается?

3. Охарактеризуйте биологическую роль фосфопротеинов.

Муцин – сложный белок – гликопротеин, обнаруживается в секретах слизистых желез. Гликопротеиды содержаться почти во всех тканях и жидкостях организма и носят общее название муцинов и мукоидов. Муцины встречаются в секретах слизистых желез. Мукоиды входят в состав различных тканей: костной (оссеомукоид), хрящевой (хондромукоид), соединительной (тендомукоид), а также яичного белка (овомукоид).

В состав небелкового фрагмента гликопротеинов входят разнообразные моносахариды и их производные (глюкоза, галактоза, манноза, фруктоза, глюкозоамин, N-ацетилглюкозамин, галактозамин, нейраминовая кислота, глюкуроновая кислота), а также гетерополисахариды (гиалуроновая кислота, гепарин, хондроитинсульфат). Для качественного и количественного анализа используются углеводные компоненты, например глюкозоамин, галактозоамин.

Гликопротеиды играют важную роль в организме, неся опорную и защитную функции.

Качественные реакции на простетические группы гликопротеинов используются для выявления и количественного определения их в различном биологическом материале и лекарственных средствах (стекловидное тело, гонадотропины и др.).

В клинической практике наиболее распространено суммарное определение гликопротеинов и мукопротеинов сыворотки крови по одному из входящих в них компонентов: гексозаминов, фукозе, сиаловым кислотам.

Принцип метода. Из гексоз, входящих в состав гликопротеинов, в присутствии концентрированной серной кислоты образуется гидроксиметилфурфурол, который с α-нафтолом дает продукт конденсации красно-фиолетового цвета.

Дата добавления: 2017-02-01