Сорбент

Подложка

Стоимость

Простота оборудования

Минимальный комплект оборудования для ТСХ состоит из пластинки (в продаже имеются готовые пластинки для ТСХ), ножниц, набора стеклянных капиллиров (могут быть с легкостью изготовлены самостоятельно), микропипеток, стеклянной камеры с крышкой, мягкого карандаша (исключительно графитовый – “простой карандаш”!, в старых руководствах рекомендуют “мягкий свинцовый карандаш), линейки (с миллиметровыми делениями), пинцета, фильтровальной бумаги, источника УФ-света (как правило – со светофильтрами в 254 и 365 нм) и нескольких пульверизаторов для опрыскивания хроматограммы растворами реактивов.

ТСХ является самым дешевым методом анализа органических веществ. Общая стоимость указанного комплекта оборудования (если использовать в качестве источника УФ-света маломощные бытовые малогабаритные УФ-лампы) и приспособлений может уложиться в 500 – 1000 грн (для сравнения – самый дешевый жидкостный хроматограф стоит около 10 тыс долларов США). Несмотря на то, что для ТСХ необходимы чистые растворители, их стоимость не может сравниться со стоимостью растворителей для ВЭЖХ. Зачастую достаточной является обычная перегонка продажного растворителя марки “ч” (“чистый”). Таким образом, в самом дорогом варианте ТСХ-анализ обходится в сумму, не превышающей 5 – 10 грн, причем львиную долю этой суммы “съедает” собственно сама пластинка.

6.2.3 Характеристика основных “участников” ТСХ

В качестве подложки для приготовления хроматографических пластин может быть применен любой материал, удовлетворяющий следующим требованиям:

– химическая устойчивость к применяемым растворителям и реагентам;

– термическая устойчивость при активации слоя;

– хорошая адгезия сорбента на поверхности подложки;

– высокое качество поверхности подложки, обеспечивающее равномерность слоя;

– сорбционная инертность подложки (особенно актуальна в препаративной хроматографии);

– пластичность, необходимая для вырезания пластинки необходимого размера;

– полезной, но не необходимым является прозрачность подложки для УФ-излучения.

Полиэфирные смолы, алюминиевая фольга и стекло в максимальной степени удовлетворяют приведенному набору требований и наиболее употребимы в коммерчески доступных пластинках для ТСХ.

В качестве сорбентов в тонкослойной хроматографии наиболее широкое применение нашли силикагель и оксид алюминия. Имеются в продаже также гидроксиаппатит, силикат магния, диатомитовая земля (смешанный силикат натрия-магния), целлюлоза и некоторые ее модификации, полиамиды.

Хотя для формирования тонкого слоя может использоваться сорбент с любым размером зерен, но для приготовления пластин высокого качества стремятся использовать как можно более однородную фракцию, что уменьшает степень размывания пятен и, в конечном итоге, обеспечивает высокое качество разделения. В большинстве случаев используются сорбенты с частицами размером 10 – 20 мкм. Увеличение размера частиц приводит к ухудшению разделяющей способности, уменьшение размера – к значительному замедлению процесса элюции; качество разделения, правда, в последнем случае увеличивается. Для приготовления пластин для ВЭТСХ используются очень узкие фракции частиц.

Популярность силикагеля как сорбента в ТСХ обусловлена его высокой активностью, большой удельной поверхностью и химической устойчивостью. Высокая гидрофильность силикагеля позволяет использовать его не только как неподвижную фазу в адсорбционной хроматографии, но и как носитель гидрофильной фазы в распределительном варианте.

Даже наиболее обезвоженный силикагель для адсорбционной хроматографии на поверхности содержит значительное количество прочно связанной воды, имеющей структуру подобную структуре льда. Это обуславливает высокую адсорбционную способность силикагеля по отношению к веществам, имеющим в своей структуре группы – акцепторы и доноры водородной связи. В большинстве случаев силикагель для хроматографии (точнее, его суспензия в воде) имеет слабокислую реакцию, что обуславливает чрезвычайно высокую сорбцию органических оснований. Способность силанольных групп, присутствующих на поверхности к диссоциации (хотя и слабой), обуславливает высокую сорбируемость ионных соединений. Все это обуславливает применение высокополярных элюентов при хроматографическом анализе органических кислот, оснований и их солей.

Свойства окиси алюминия во многом похожи на свойства силикагеля, но она отличается от последнего более высоким значением pH водной суспензии и меньшей удельной поверхностью. В силу координационной ненасыщенности оксида алюминия, он проявляет значительно более высокое сродство к гидроксилсодержащисм соединениям, чем силикагель.

Благодаря высокой химической и термической стабильности этих двух сорбентов, хроматограммы, полученные с их применением, можно обрабатывать практически любыми реагентами, что значительно повышает информативность анализа по сравнению с анализом на других сорбентах.

Для формирования механически устойчивых слоев к сорбентам могут добавляться связующие – крахмал, гипс, поливиниловый спирт. Наиболее прочные слои получаются с применением крахмала, однако в этом случае нельзя применять агрессивные проявляющие реагенты (серная кислота, сильные окислители). Этих недостатков лишен гипс, но слои с его применением оказываются намного мягче, а процесс элюции – медленнее. Для флуоресцентного обнаружения нефлуоресцирующих веществ к сорбентам добавляют флуоресцентные индикаторы – флуоресцеин, сульфид цинка-кадмия и т.п.

Дата добавления: 2014-01-13