ЛПЗ № 4: непостоянные клеточные включения

ЛПЗ № 3: Морфология клеток

Цель занятия:

· Ознакомиться со структурой клетки

· Научиться различать структуры с помощью светового микроскопа.

Задания:

· Изучить препарат «Растительные клетки кожицы лука» рассмотреть их и зарисовать при большом увеличении;

· Изучить препарат «Нейроны спинномозгового узла», рассмотреть нейроциты и зарисовать их при большом увеличении;

· Изучить препарат «Аппарат Гольджи» под большим увеличением микроскопа, найти и обозначить локализацию пластинчатого комплекса;

· Изучить электронограммы и обозначить структуры

Рис. 2 Растительные клетки кожицы лука. Ув.40

Рис. 3 Аппарат Гольджи Ув. 40

Цель занятия:

· Ознакомиться с клеточными включениями и методами их окраски

· Научиться определять эти структуры под микроскопом

· Уметь дать определение этим включениям

Жиры обычно окрашивают жирорастворимыми красителями. К ним относятся суданы.

Гликоген – это сильно разветвленный сложный полисахарид синтезируемый из глюкозы. Он накапливается в гепатоцитах печени., волокнах поперечнополосатой мускулатуры, хряще и других. Гликоген под воздействием ферментов расщепляется на моносахариды. Гликоген хорошо растворяется в воде и поэтому фиксируют его в специальных фиксаторах. Лучшим оказался фиксатор, предложенный А.Л. Шабадашем (спирт, азотнокислая медь, азотнокислый кальций, формалин).

Для гистохимического выявления гликогена применяется реакция Шиффа с фуксинсернистой кислотой после окисления периодатами натрия или калия. Метод основан на окислительном расщеплении 1,2 – гликоля гликогена на альдегиды. Контролем реакции является предварительная обработка материала в амилазе слюны.

Для определения нуклеиновых кислот в качестве фиксатора обычно используется жидкость (смесь) Карнуа. Окрашивание срезов производится методами Браше и Эйнарсона. При использовании метода Браше срезы обрабатываются двумя основными красителями метиловым зеленым и пиронином. При этом метиловый зеленый окрашивает ДНК, локализованные в хроматиде ядра, а пиронин соединяется с РНК, находящейся как в ядре, так и в цитоплазме. Таким образом, одновременно окрашиваются обе нуклеиновые кислоты.

При использовании метода Эйнарсона (1951) красителем является галлоцианин, который взаимодействуя с хромовокалиевыми квасцами, образует краплак-катион. При низших значениях среды (рН=0,8-1,75) краситель связывается с нуклеиновыми кислотами. Эта реакция считается высокоспецифичной и поэтому применяется для количественного анализа нуклеиновых кислот. Основным недостатком метода является невозможность визуальной дифференцировки ДНК и РНК.

Для выявления белков, содержащих три важнейших аминокислоты – тирозин, триптофан, гистидин применяется метод тетразониевого азосочетания по Даниели (1947). Он основан на двух реакциях, следующих одна за другой. Первая реакция азосочетания происходит между тетразосоединением и аминокислотами. Затем свободная диазогруппа реагирует амино- и оксигруппами. В результате получается окраска серо-голубого цвета разной интенсивности.

В гистохимии белков можно применять метод сулема – бромфеноловый синий. Он был предложен Деррамом (1950) для определения белка при хромотографии на бумаге. В настоящее время его модификация используется для гистохимического выявления общего белка. Установлено, что на препаратах количество связанного красителя пропорционально количеству белка в соответствии с законом Ламберта – Бера.

Задание:

· Рассмотреть препарат «Включения гликогена в печени» и обозначить включения гликогена в гепатоцитах;

· Рассмотреть препарат «Нуклеиновые кислоты в нейронах спинального ганглия», найти включения ДНК и РНК в ядрах и ядрышках нейронов;

· Рассмотреть препарат «Включения липидов в клетках коры надпочечников» в виде мелких капелек;

· Ознакомиться с электронограммами включений.

Рис. 4 Включения гликогена в печени Ув. 40х

Рис. 5 Нуклеиновые кислоты в нейронах спинального ганглия

Рис. 6Включения липидов в клетках коры надпочечников Ув. 40х

Дата добавления: 2015-04-30