Выделение бактерий в чистую культуру и определение вида бактерии

С водного сырья.

Определение процентного соотношения бактериальных форм в посевах

Обработка полученных данных

P. Salmonella.

Для обнаружения сальмонелл проводится посев продукта на среды обогащения (селенитовый бульон, магниевая среда, среда Мюллера, среда Кауфмана) после встряхивания взвеси продукта в накопительной среде (30 мин) делают высев 0,2 мл поверхностным способом на плотные элективные среды Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитный агар (ВСА).Посевы на средах обогащения инкубируют 16-24 часа при температуре 37⁰С и делают повторные посевы на те же плотные питательные среды. Посевы проращивают сутки при температуре 37^ºС. На среде Эндо сальмонеллы образуют бледно-розовые колонии, на среде Плоскирева – прозрачные или слегка розоватые колонии, а на ВСА – черные с металлическим блеском, среда под колонией темнеет.

Из подозрительных колоний материал высевают штрихом и уколом в скошенный столбик комбинированной среды Ресселя или Олькеницкого. Посев термостатируют сутки при температуре 37⁰С. При росте сальмонелл столбик краснеет и чернеет, происходит его разрыв, скос не изменяется. Окончательный вывод о наличии сальмонеллы делают после проведения реакции агглютинации выделенной бактерии со специфичной для сальмонеллы сывороткой. При наличии сальмонеллы происходит склеивание бактерий с антителами сыворотки, образуются тяжелые хлопья агглютината, которые оседают, капля просветляется. В случае отсутствия сальмонеллы в капле образуется достаточно стойкая мелкодисперсная взвесь, капля остается мутной. Для проведения реакции агглютинации исследуемый материал биологической петлей смешивают на стерильном предметном стекле с каплей специфичной для сальмонеллы сыворотки.

Для определения процентного соотношения бактериальных форм в посевах микрофлоры водного сырья необходимо просчитать общее число колоний в чашке Петри (для анализа выбирается одна из чашек анализа по определению КМАФАМ, в которой колонии по возможности не сливаются друг с другом). Далее подсчитывают число колоний с однотипными культуральными признаками. Из каждого типа колоний выполняют мазок и окрашивают по Граму. Далее общее число колоний принимают за 100% и определяют, сколько процентов приходится на каждую морфологическую форму, составив пропорции.

Для определения вида бактерий, прежде всего, ее необходимо выделить в чистую культуру. Для этого материал из одной из колоний выращенных на чашке Петри при анализе микрофлоры рыбы или морепродуктов, профламбированной охлажденной биологической петелькой отсевают на свежескошенный стерильный РПА. (для анализа следует выбирать колонию однородную по культуральным признакам и находящуюся на некотором расстоянии от других). Для выявления сероводорода и индола на края пробирки подвешивают бумажки, смоченные уксуснокислым свинцом (на H₂S, и щавелевой кислотой – на индол). Посев термостатируют при температуре 37⁰С 24 часа. Далее проверяют чистоту культуры – для этого из материала, выращенного на косом агаре, делают мазок и окрашивают по Граму. Если культура чистая – в мазке будут обнаружены клетки одной морфологической формы. Отмечают способность культуры вырабатывать H₂S (бумажка, смоченная уксуснокислым свинцом чернеет, реакция проявляется четко через несколько суток термостатирования) и индол (бумажка, смоченная щавелевой кислотой розовеет).

Далее подробно описывают культуральные признаки, изучают морфологические и физиолого-биохимические признаки бактерии.

Дата добавления: 2015-07-02