Стафилококковая интоксикация

Стафилококки широко распространены в природе. В настоящее время различают два вида стафилококков: сапрофитные и патогенные. Сапрофитные обитают в почве, воде, воздухе и на поверхности растений. Патогенные стафилококки находятся на кожном покрове, а также на слизистых оболочках глаз, носа, ротовой полости, кишечника и так далее человека и животных.
Это позволяет отнести их к санитарно-показательным микроорганизмам — индикаторам воздушно-капельного загрязнения некоторых пищевых продуктов и объектов внешней среды. Основная роль в инфекционной патологии животных и человека принадлежит S. aureus, S. pyogenes.

Морфология. Стафилококки — округлые клетки диаметром 0,5-1,5 мкм, в препаратах располагаются в виде отдельных скоплений неправильной формы, напоминающих гроздь винограда. Грамположительные, спор и капсул не образуют, неподвижны.

Культивирование. Факультативные анаэробы. Хорошо растут на универсальных питательных средах при температуре +35...+40°С (возможна жизнедеятельность в интервале от +6,0 до +46°С, оптимум рН 7,0-7,5. Относятся к галофилам, способны расти в присутствии 15%-ного хлорида натрия или 40%-
ной желчи, что используется при индикации и идентификации. На МПА образуют круглые с ровными краями колонии диаметром 2-5 мм. S. aureus синтезирует золотистый или оранжевый пигмент, встречаются и беспигментные штаммы. При росте в МПБ стафилококки образуют диффузное помутнение с последующим выпадением рыхлого хлопьевидного осадка. На МПЖ растут по уколу, затем образуют воронку, наполненную жидкостью. На кровяном агаре патогенные штаммы стафилококков образуют значительную зону гемолиза. Патогенные стафилококки синтезируют и секретируют высокоактивные экзотоксины и ферменты. Среди экзотоксинов выделяют три вида: гематоксины, лейкоцидин и энтеротоксины.

Устойчивость. Стафилококки — относительно устойчивые микроорганизмы, прямые солнечные лучи убивают их только через несколько часов. В жидкой среде при температуре +70°С погибают через 1 ч, при +85°С — через 30 мин, при +100°С —за несколько секунд. Сухой жар убивает их за 2 ч.

Из дезинфектантов 1%-ный раствор формалина и 2%-ный раствор гидроокиси натрия убивают их в течение 1 ч, 1%-ный раствор хлорамина — через 2-5 мин.

Стафилококковое пищевое отравление — типичный бактериальный токсикоз, занимающий по распространенности второе место после сальмонеллезной инфекции. Симптомы развития токсикоза обусловлены действием экзотоксина и энтеротоксина, выделяемых стафилококками и накапливающихся в
продуктах. Энтеротоксин термостабилен, выдерживает кипячение до 30 мин и лишь частично разрушается после автоклавирования при 0,5 атм.

Энтеротоксины А, В, С, D, Е и F ответственны за развитие пищевых интоксикаций. Развитие болезни такое же, как при других пищевых отравлениях, проявляется рвотой, болями и диареей уже через 2-6 ч после употребления в пищу инфицированных продуктов, обычно кондитерских изделий с кремом,
консервов, мясных и овощных салатов.

Все типы токсинов не разрушаются под воздействием протеолитических ферментов (трипсин, хемотрипсин), однако при низких значениях рН пепсин инактивирует стафилококковый энтеротоксин. Он устойчив к воздействию желудочного сока, хлора, формалина. Внешний вид продуктов, содержащих энтеротоксин, не изменяется.

Энтеротоксины — термостабильные полипептиды; образуются при размножении энтеротоксигенных стафилококков в питательных средах, продуктах питания (молоко, сливки, творог и др.), кишечнике. Они устойчивы к действию пищеварительных ферментов. Энтеротоксины вызывают пищевые ток-
сикозы человека, к ним чувствительны кошки, особенно котята, и щенки собак. Установлено, что экзотоксин полностью не разрушается при получасовом или даже часовом кипячении. Наличие энтеротоксина в пищевых продуктах и культурах определяют в РДП со стафилококковыми антисыворотками к энтеротоксинам А, В, С, D, Е, F.

Лабораторная диагностика. Для выделения стафилококков и обнаружения энтеротоксина молоко исследуют при маститах, кровь — при септицемии, остатки продуктов — при пищевых отравлениях. Исследуемый материал одновременно сеют в чашки с накопительными средами: молочно-солевым и желточно-солевым агаром. На чашках с молочно-солевым агаром учитывают образование пигмента. На желточно-солевом агаре большинство патогенных стафилококков вызывают лецитовителлазную реакцию, проявляющуюся образованием вокруг колонии зоны помутнения с радужным венчиком по периферии. С выделенной культурой ставят реакцию плазмокоагуляции с цитратной плазмой крови кролика: при наличии у стафилококка фермен-
та коагулазы плазма свертывается.

В пищевых продуктах с наличием стафилококков и их токсинов органолептические изменения не происходят. Интоксикации стафилококкового происхождения связаны с накоплением в инфицированной пище энтеротоксина. Классическое проявление поражения человека отмечается, когда в продукте
(1 г) содержится 105-107 стафилококков, вырабатывающих токсин, 1 мкг которого вызывает пищевую интоксикацию. При подтверждении диагноза молоко коров, больных маститами, рекомендуется кипятить и использовать для кормовых целей, так как токсины и другие продукты патологического об-
мена ухудшают его качество и делают его совершенно непригодным в пищу. Продажа молока от маститных коров запрещена.

Обеззараживание условно годного мяса. При генерализованном процессе, обнаружении изменений в органах всю тушу вместе с органами направляют на техническую утилизацию.

Пищевые отравления смешанной этиологии обусловлены совместным действием двух и более возбудителей, например, Вас. cereus со Staph, aureus или Вас. cereus совместно с Е. coli. Пищевые отравления грибковой этиологии — это отравления, вызванные размножением токсигенных плесневых грибов, которые выделяют микотоксины в процессе жизнедеятельности, а также при разрушении мицелия. Известны более 200 видов грибов, способных при определенных условиях продуцироват микотоксины. Данная проблема находится в центре внимания ВОЗ, институты питания разрабатывают предельно допустимые концентрации (ПДК). Например, наличие афлотоксина допус-
кается до 5 мг/кг, а патулина — до 50 мг/кг.

Отбор средней пробы. В лабораторию посылают пробу массой 500 г. Диагностика микотоксикозов особенно трудна, так как возбудитель и токсин надо обнаружить как в исследуемых продуктах, так и в организме больного.

1. Органолептическая оценка включает изучение внешнего вида, цвета, запаха корма, зерна, орехов, сырья, готовых продуктов питания и т. д.

2. Микроскопическое исследование. Видимые части мицелия, находящиеся на поверхности исследуемого продукта, вносят на предметное стекло в каплю, состоящую из равных объемов глицерина, спирта и воды, закрывают покровным стеклом, далее изучают микрокартину с увеличением в 400 раз. Обращают внимание на строение мицелия и органов спороношения, наличие перегородок. Особую трудность при идентификаципредставляет то, что микроскопические грибы часто имеют различную морфологию в естественном субстрате и искусственных питательных средах, поэтому применяются различные дополнительные исследования для определения вида и токсичности
выделенных микроскопических грибов.

3. Микологическое исследование присланного продукта, корма проводят параллельно и одновременно в двух направлениях:

3.1. Посев на питательные среды для определения вида.
Для выращивания применяют специальные питательные среды: Сабуро, Чапека, сусло-агар, в состав которых вводят антибиотики или ингибиторы, подавляющие развитие сопутствующей бактериальной микрофлоры. Культивирование посевов проводится при температуре +25...+28°С в течение 3-10 дней, по мере появления колоний приступают к определению рода и вида микроскопических грибов. Для этого изучают культуральные и морфологические признаки выросших грибов.

3.2. Токсикобиологическое исследование проводят для обнаружения микотоксина в исследуемом продукте и токсичности гриба. Для этого применяются следующие методы:

■ биопроба на животных с последующим наблюдением;

■ проба на простейших;

■ кожная проба на кроликах;

■ химический метод (тонкослойная хромотография).
Биопроба на животных проводится для обнаружения микотоксина в исследуемом продукте или корме. Используют 10 молодых белых мышей весом 20-25 г или морских свинок. Суточную норму корма заменяют исследуемым продуктом или кормом, который скармливают не менее 10 дней подряд. Ток-
сикоз проявляется быстрее, если кормить подопытных животных на голодный желудок. Изучают появившиеся клинические признаки: рвота, диарея, взъерошенная шерсть. Затем животных усыпляют, исследуют внутренние органы, отмечают наличие кровоизлияний, жировое перерождение тканей печени, желудка.

Определение токсичности выделенных микроскопических грибов можно провести пробой на простейших парамециях —Paramecium caudatum.

Из культуры грибов, выращенных на среде Чапека, готовят водный экстракт по следующей методике: мицелий гриба помещают в пробирку и заливают стерильной водой в соотношении 1:1, встряхивают и экстрагируют 24 ч в холодильной камере при температуре +4°С. Каплю полученного экстракта на-
носят на предметное стекло и в эту же каплю вносят взвесь простейших. Если выросший гриб был токсичным, парамеции через 3-5 мин прекращают движение, а в дальнейшем происходит их гибель и лизис клеток.

Более сложный метод — это «кожная проба на кроликах».
Для постановки данной пробы 50 г исследуемого измельченного корма или продукта, в котором определяют наличие токсического гриба, помещают в банку и заливают спирт-эфиром (1:3), так чтобы жидкость была на 2-3 см выше изучаемого продукта, экстрагируют 24 ч при комнатной температуре, периодически встряхивая. Затем полученный экстракт процеживают через фильтровальную бумагу в бюкс, который ставят в вытяжной шкаф до полного испарения растворителя. Для ускорения испарения сосуды с экстрактами ставят в водяную баню при температуре +45...-г50°С. В результате этого на дне остается токсин в виде маслянистой массы.

Для постановки кожной пробы используют кроликов весом 2 кг с непигментированной кожей, за несколько часов до опыта выстригают участок кожи 3x6 см. Полученный токсин дважды через сутки втирают в подготовленный участок кожи кролика, затем наблюдают за появляющимися изменениями. Для предупреждения расчесывания и слизывания нанесенного экстракта
на шею кролика надевают картонный воротник. В зависимости от степени токсичности микроскопических грибов на коже кролика последовательно появляются покраснение, утолщение кожной складки, выпотевание экссудата,
трещины и некроз кожи.

Для определения гемолитической активности полученного токсина применяют химический метод. На поверхности кровяного агара в чашке Петри раскладывают 5 дисков из фильтровальной бумаги, на которые наносят каплю полученного маслянистого токсина, диффундирующего в толщу агара. Если
исследуемый продукт или корм содержал токсичный микроскопический гриб, происходит лизис эритроцитов и вокруг дисков появляются прозрачные зоны различного диаметра в зависимости от силы токсина. На контрольные диски наносят растительное масло, вокруг них не должно быть никаких изме-
нений.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1. С какой целью проводится санитарно-микробиологическое ис-
следование пищевых продуктов?

2. С какой целью проводится количественное и качественное ис-
следование продуктов?

3. С какой целью проводится определение количества МАФАнМ?

4. Какие инфекции относятся к пищевым токсикоинфекциям?

5. В каком случае возникает пищевой токсикоз?

6. Наличие каких микроорганизмов свидетельствует о санитарном
неблагополучии производства?

Дата добавления: 2014-01-03