Указания к оформлению лабораторной работы

Ход работы

Исследуемый материал и реактивы

1. Дрожжи (сухие). 2. Песок (щепотка). 3. Эфир. 4. Раствор NaOH (0,4%), (10%). 5. Раствор уксусной кислоты (1%). 6. Раствор Н₂SО₄ (10%). 7. Раствор СuSO₄ (1%). 8. Раствор NH₄OH (концентрированный). 9. Раствор AgNО₃ (1%). 10. Спиртовой раствор α-нафтола. 11. Раствор H₂SO₄ (концентрированный). 12. Молибденовый реактив. 13. Фильтровальная бумага.

Одним из источников для выделения нуклеопротеидов являются дрожжи. Для этой цели 10 г дрожжей растирают в ступке со щепоткой песка, 0,5 мл эфира, добавляют 20 мл 0,4% раствора NaOH и продолжают растирание в течение 15 мин. После этого разливают содержимое ступки в центрифужные пробирки, уравновешиваютих и центрифугируют в течение 5-10 мин при 2500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают в стакан и при постоянном помешивании добавляют раствор уксусной кислоты (1%) в количестве 15-20 мл для осаждения нуклеопротеида. Выпавший осадок РНК-протеина отделяют путем центрифугирования и выделенный нуклеопротеид гидролизуют.

А. Гидролиз нуклеопротеина. Полученный осадок переносят в коническую колбу, добавляют к нему 10 мл 10% раствора Н₂SО₄ и закрывают пробкой со вставленной в нее стеклянной трубкой 20-30 мл длинной (воздушный холодильник). Колбу помещают в водяную баню и нагревают в кипящей водяной бане 1 час. После этого охлаждают колбу до комнатной температуры и фильтруют. В фильтрате определяют продукты гидролиза.

Б. Биуретовая реакция на пептиды. К 5-6 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10% раствора NаОН и 1 каплю 1% -го раствора СuSO₄. При наличии белка жидкость приобретает характерную сине-фиолетовую окраску.

В. Проба на пуриновые основания. 0,5 мл гидролизата нейтрализуют 1-2 каплями концентрированного раствора NH₄OH и добавляют 5 капель 1% раствора AgNО₃. Через несколько минут образуется рыхлый осадок соединений пуриновых оснований с серебром, окрашенный в бурый цвет.

Г. Качественная реакция на углеводный компонент. (Реакция Подобедова-Молиша). К 0,5 мл гидролизата добавляют 1 -2 капли спиртового раствора α-нафтола, перемешивают и осторожно наслаивают 0,5 мл концентрированной H₂SO₄. На границе раздела жидкостей появляется фиолетовое кольцо, свидетельствующее о наличии углеводного компонента в нуклеопротеидах.

Д. Молибденовая проба на фосфорную кислоту. К 0,5 мл молибденового реактива добавляют 5 капель гидролизата и кипятят смесь на пламени горелки. В присутствии фосфорной кислоты жидкость окрашивается в лимонный цвет. После охлаждения в струе воды наблюдают появление желтого кристаллического осадка - фосфомолибдата аммония,

В тетради для лабораторных работ запишите принцип метода, ход работы и зарисуйте схему полного распада РНК–протеинов с указанием, входящих в них компонентов.

Контрольные вопросы

1. Напишите схему распада нуклеопротеинов.

2. В чем отличие отдельных мононуклеотидов? Напишите реакцию гидролиза мононуклеотида (формулами).

3. Каков принцип выделения ДНК из ткани и её обнаружения?

4. Охарактеризуйте качественные реакции на составные части нуклеопротеинов.

Дата добавления: 2017-02-01