Стимулювання суперовуляції

Самки ссавців народжуються з великим (кілька десятків і навіть сотень тисяч) числом статевих клітин. Більшість з них поступово гинуть у результаті атрезії фолікулів. Однак, практично всі фолікули, що ростуть, реагують на гонадотропну стимуляцію, яка створює умови для їх дозрівання. Обробка самок гонадотропінами у фолікулярній фазі статевого циклу або в лютеальній фазі циклу в поєднанні з індукуванням регресії жовтого тіла простагландином викликає численну овуляцію або так звану суперовуляцію.

Суперовуляцію у корів-донорів викликають ін'єкцією гонадотропіну в поєднанні з простагландином й іншими біологічно активними речовинами. Час введення гонадотропних гормонів істотно впливає на рівень суперовуляції у корів. Ін'єкцію гормонів розпочинають з 8 по 14 день статевого циклу (залежно від виду препарату гонадотропіну і вибраної схеми). Зазвичай це проводять з 10 по 12 день естрального циклу, тобто в лютеальній фазі циклу (в період, коли найбільш виражена функція жовтого тіла). Введення в цей період екзогенних гонадотропінів викликає посилений ріст фолікулів. Через дві доби вводять простагландин і триразово осіменяють корову-донора з інтервалом у 12 годин. Ембріони вимивають на 7...8 добу після 1-го осіменіння.

У день початку обробки гонадотропіном досліджують стан яєчників ректальним способом, визначають розміри яєчників (наприклад, 2,5x3,0 см лівий яєчник і 1,5x2,0 см правий яєчник), якість жовтого тіла (відмінна, добра, задовільна, незадовільна); до моменту обробки гонадотропіном в яєчниках тварини має бути функціонуюче жовте тіло діаметром близько 1,5 см.

Для гормональної обробки корів використовують в основному два типи гонадотропінів − ліофілізований гонадотропін сироватки жеребних кобил (ГСЖК) і фолікулостимулюючий гормон (ФСГ), який найчастіше одержують із гіпофізу свиней. ГСЖК одержують із сироватки крові кобил у період від 40-го до 100-го дня жеребності. У цей період у крові кобил присутні високі концентрації гонадотропінів. У перший місяць жеребності виявлено високу гонадотропну активність гіпофізу і недостатню активність жовтого тіла, а трохи пізніше в матці утворюються ендометріальні чаші − тимчасові ендокринні залози, які секретують і виділяють у кров гонадотропіни, що викликають ріст і розвиток великих фолікулів. Після овуляції на їх місці утворюються жовті тіла, що виділяють додаткові кількості прогестерону.

Співвідношення ФСГ і ЛГ (лютеїнізуючий гормон) в ГСЖК впливає на ефективність суперстимуляції. Наприклад, за співвідношення ФСГ:ЛГ 1,3:1,0 ін'єкція ГСЖК коровам викликає дозрівання приблизно 6 фолікулів і овуляцію 4 яйцеклітин. Застосовується і комплексний препарат ФСГ і ЛГ (співвідношення 5:1), результати такої стимуляції значно ефективніші за рівнем суперовуляції. ГСЖК має тривалий (до 5 діб) період напіврозпаду в організмі тварини, тому перевагою його використання є виконання лише однієї ін'єкції для появи суперовуляції. Це дозволяє знизити витрати праці і зменшити стресову дію на тварин. Активність ГСЖК позначається в інтернаціональних (ІЕ, IU) або мишиних (м.е., т.и.) одиницях дії. Одна ІЕ еквівалентна близько 2,33...2,43 м.е. Звичайна доза ГСЖК, що вводиться одноразово внутрішньом'язово, становить 2500...3000 ІЕ. Але недолік застосування ГСЖК пов'язаний з тим, що великі його дози можуть викликати кісти яєчників. Кіста яєчника являє собою порожнину із серозним або слизистим вмістом і утворюється із фолікулів, які не розірвалися в результаті переродження і скупчення в них рідини. Такі кісти називають фолікулярними. Причини виникнення кіст в яєчниках пов'язані з невідповідним годуванням, відсутністю моціону, запальними процесами в матці та ін. Кіста яєчника порушує його функцію і тому виникають перегули. Кісти при лікуванні можна роздавлювати пальцями, масажуючи яєчники через пряму кишку. Проте кісти часто після роздавлювання регенерують і тому їх доводиться роздавлювати кілька разів.

ГСЖК вводять на 8... 13 день циклу, найкраще на 10... 12 день, тобто в середині циклу, коли найбільш висока активність жовтого тіла яєчника для упередження передчасної овуляції через утворення великої кількості естрогену в дозріваючих фолікулах. Простагландин F2 вводять внутрішньом'язово дозою 500 мкг (2 мл препарату Естрофан − лютеолітичний аналог простагландину) за 48 годин після введення ГСЖК. Охота у корів наступає за 48 годин після введення Естрофану.

Для викликання суперовуляції у корів застосовують декілька схем гормональної обробки. Найчастіше застосовують таку: з метою підвищення виходу ембріонів тваринам-донорам на початку прояву охоти внутрішньом'язово ін'єктують вітаміни А і Е. Також, одночасно з кормом, один раз на добу протягом 18...25 днів дають йодний калій дозою 100...200 мг на одну голову. Під час уведення гонадотропіну додатково ін'єктують половину дози вітамінів А і Е (табл. 6).

Таблиця 6

Схема обробки корів для викладання суперовуляції

День естрального циклу	Назва препарату	Доза
	Вітамін А Вітамін Е Йодний калій	150000 м.о. 100 мг 100...200 мг
10...12	ГСЖК ВітамінА Вітамін Е	2500...3000 IE 75000 м.о. 50 мг
12...14	Простагландин клопростенола або ПГF2	500 мкг 30мг
14...16	Охота і осіменіння
21...23	Нехірургічне вимивання ембріонів

Недоліком застосування ГСЖК є важкість підбору точної дози цього препарату. За введення підвищених доз може відбутися кістозне переродження яєчників. Крім того, введення ГСЖК часто призводить до прояву небажаних імунних реакцій, які супроводжуються утворенням антитіл. У цьому разі повторні обробки ГСЖК безрезультатні протягом 60 днів через тривалу дію ГСЖК. Для нейтралізації надлишків сироваткового гонадотропіну, підвищення заплідненості яйцеклітин і якості ембріонів рекомендують застосовувати антисироватку до ГСЖК. її вводять внутрішньом'язово через 24 години після початку прояву охоти і після другого осіменіння дозою 1...2 мл залежно від кількості ГСЖК, для забезпечення нейтралізації не менше однієї третини вживаної дози ГСЖК. Більш раннє введення антисироватки призводить до зниження реакції яєчників на ГСЖК у корів-донорів.

За використання ГСЖК і антисироватки стабільні результати одержують при двох повторних обробках тварин. Подальші обробки по цій схемі рівень суперовуляції не знижують, проте зменшують кількість реагуючих на суперстимуляцію тварин (до 50% за третьої обробки) і вихід ембріонів хорошої якості.

ФСГ одержують із гіпофізу тварин, найчастіше свиней. ФСГ має нетривалий період напіврозпаду (до 6 год.). Тому його вводять в організм протягом 4...5 днів уранці і увечері з інтервалом між ін'єкціями 12 год. Введення препаратів ФСГ разом з простагландином Р2_а має переваги перед ГСЖК. По-перше, він забезпечує більший вихід повноцінних ембріонів. ФСГ також знижує відмінності в результатах реакції яєчників окремих корів, дає стабільніші результати. На відміну від ГСЖК за використання ФСГ методику обробки можна стандартизувати (у разі застосування ГСЖК співвідношення в ньому ФСГ і ЛГ коливається залежно від серії). Крім того, препарати ФСГ, на відміну від ГСЖК, не викликають імунної реакції та вироблення антитіл і не спричиняють кістозних змін в яєчниках. Добре зарекомендували себе препарати «ФСГ-П» («FSH-P», США), «Фолікотропін» (Spofa, Чехія), «ФСГ-супер» (м. Боровськ, Росія).

Застосовують різні схеми введення ФСГ. Найбільшого поширення набули схеми (табл. 7) з щоденним зменшенням кількості введеного препарату (хоча застосовуються схеми і з однаковою кількістю гормону), при загальній дозі від 32 до 50 мг ФСГ. Ін'єкції ФСГ починають на 8... 10 день естрального циклу. Кращі результати одержують за введення ФСГ, починаючи з 10 дня циклу.

Таблиця 7

Схема введення ФСГ коровам-донорам ембріонів

День естрального циклу	Назва препарату	Доза
8...10	ФСГ-Р	12мг/15мг
9…11	ФСГ-Р	10мг/12мг
10…12	ФСГ-Р Простагландін F2 клопростенола або ПГF2	6мг/10мг 500мкг 30мг
11…13	ФСГ-Р	5мг
12…14	Охота і осіменіння
19…21	Нехірургічне вимивання ембріонів
Усього ФСГ	32мг/42мг

ФСГ вводять внутрішньом'язово в область крижів. Залишок розведеного ФСГ заморожують і зберігають до наступної обробки.

Допускається лише одноразове заморожування. Зберігання розчиненого ФСГ в холодильнику за температури +5°С допускається в межах 12 годин, після чого його активність знижується.

Недоліком ФСГ є необхідність багатократних ін'єкцій. У зв'язку з цим розроблявся спеціальний препарат Пролонгон, який продовжував би дію ФСГ і зробив можливим його одноразову ін'єкцію. Проте, цей препарат поступається за своєю ефективністю багатократному введенню ФСГ і не набув широкого розповсюдження в практиці трансплантації.

Дата добавления: 2017-02-01