Анализ окрашенной лекарственной формы.

Подлинность.

Анализ инъекционных лекарственных форм.

Лабораторная работа №5. Раствор витамина В₁₂ 0,002% для инъекций.

Цель работы: Оценка качества анализируемой лекарственной формы.

Витамин В₁₂ Цианокобаламин. - С₆₃Н₈₈СоN₁₄О₁₄Р M.масса. 1355,4 г/моль

Характерной химической особенностью молекулы цианокобаламина является наличие атома кобальта и цианогруппы, образующих координационный комплекс.

Основным способом идентификации и определения чистоты витамина В₁₂ служит его спектральная характеристика. Раствор препарата- п розрачная жидкость от слабо розового до ярко-красного цвета.

0,002% раствор витамина В₁₂ должен иметь характерный спектр поглощения с максимумами при длинах волн 278, 361 нм (в ультрафиолетовой области спектра) и 548 им (в видимой области спектра) и удельными коэффициентами поглощения в указанных точках соответственно 115, 207 и 64.

1. По собственной окраске раствора.

Фотометрические методы определения витамина B₁₂, основаны на естественной красно-розовой окраске растворов цианокобаламина, обусловленной наличием кобальта в молекуле.

Определяют оптическую плотность (D) раствора, который готовят разведением препарата водой до содержания около 0,02мг В₁₂ в 1мл, в кювете с толщиной слоя 1 см при длинах волн: 278±1нм; 361±1нм и 548±2нм. Раствор сравнения – вода.

Отношение должно быть от 3,0 до 3,4.

Отношение должно быть от 1,7 до 1,88.

2. Для качественной характеристики витамина B₁₂ могут быть использованы и химические методы, основанные на цветных реакциях в результате различных превращений молекулы витамина. В качестве реакции подлинности используют реакцию с раствором нитрозо-Р-соли после разрушения витамина азотной кислотой и создания определенного значения рН среды.

Нитрозо-Р-соль равно как и -нитрозо- -нафтол, образуют окрашенные в красный цвет комплексы с кобальтом после разрушения молекулы витамина B₁₂ .

Нитрозо Р-соль

Выполнение реакции

1 мг препарата сплавляют с 0,05 г бисульфата калия в фарфоровом тигле, охлаждают, прибавляют 3 мл воды и нагревают до растворения плава. Затем нейтрализуют раствором едкого натра по фенолфталеину, прибавляют 0,5 г ацетата натрия, 0,5 мл разведенной уксусной кислоты и 0,5 мл 0,5% раствора нитрозо-Р-соли; появляется красное окрашивание, сохраняющееся после прибавления 0,5 мл соляной кислоты и кипячения в течение 1 минуты.

Количественное определение. Витамин В₁₂определяют спектрофотометрическими методами.

1. По собственной окраске раствора.

Методика определения

Препарат разводят водой до содержания около 0,02мг В₁₂ в 1мл, измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны: 361±1нм. Раствор сравнения – вода.

Содержание витамина В₁₂ вычисляют по формуле:

Х= D· 10 V₁/207 V,%

D – оптическая плотность раствора;

207 – удельный показатель поглощения чистого цианокобаламина при длине волны 361 нм;;

V₁ – объем мерной колбы;

V – объем препарата (аликвота);

2.По цветной реакции кобальта с роданидом.

Определение кобальта основано на реакции с роданидом (тиоцианатом). В ацетоне кобальт образует с роданидом комплекс синего цвета:

Co²⁺ + 6CNS^- = [Co(CNS)₆]^4-

Методика определения

1) Приготовление рабочего раствора.

Рабочий раствор кобальта (0,1мг/мл) готовят разведением стандартного раствора CoCl₂ (1мг/мл). Для этого в мерную колбу на 50мл берут пипеткой 5мл стандартного раствора и доводят водой до метки.

2) Построение градуировочного графика.

В мерные колбы на 25мл последовательно наливают мерной пипеткой 1, 2, 3, 4, 5 мл рабочего раствора кобальта (0,1мг/мл). В первые четыре колбы добавляют дистиллированную воду до объема 5мл (т.е. 4, 3, 2, 1мл соответственно), затем во все колбы прибавляют по 0,5мл соляной кислоты 1 моль/л, по 5мл роданида аммония (50%) и до метки доливаем ацетон. Хорошо перемешивают. Измеряют оптическую плотность (D) полученного раствора на спектрофотометре или КФК при 590нм в кювете на 1см. Раствор сравнения – вода.

Полученные данные записывают в виде таблицы:

№ колбы	V пипетки, мл	CСо мг/мл ^*)	D
	1,0
	2,0
	3,0
	4,0
	5,0

^*) Концентрацию кобальта рассчитывают по формуле:

С_Co = Сраб.р-ра ·V / V₁ ;

Где, V – объем пипетки;

V₁ – объем мерной колбы;

По полученным данным строят градуировочный график в координатах:

С_Со- D.

4)Определение концентрации кобальта в витамине В_12.

После разрушения витамина В₁₂ и создания оптимального значения рН, полученный раствор разводят (V₂) до концентрации примерно 0,1 мг/мл, отбирают пипеткой 2мл (V) в мерную колбу на 25 мл (V₁), добавляют 3мл воды, 0,5мл 1М НСl и 5мл 50% раствора роданида аммония. Доводят водой до метки. После перемешивания определяют оптическую плотность раствора в тех же условиях.

Концентрацию кобальта С_Со в растворе находят по градуировочному графику.

Содержание Со в мг рассчитывают по формуле:

m(Со) = C_Co·V₁ V₂ /V

где V₂ – объем колбы, в которой разводили раствор после разрушения витамина В₁₂;

Зная m(Со) и М(С₆₃Н₈₈СоN₁₄О₁₄Р) = 1355г/моль, можно рассчитать массу витамина В₁₂ в ампуле и его массовую долю(ω) в %.

Лабораторная работа №6. Фурацилин. Раствор фурацилина 0,02%;

Цель работы: Оценка качества анализируемой лекарственной формы.

Фурацилин C₆H₆N₄O₄

5-нитрофурфурола семикарбазон М.масса 198,14 г/моль

Очень мало растворим в воде, мало растворим в 95% спирте, практически нерастворим в эфире, растворим в щелочах.

Подлинность

*)

**)

Реакции подлинности фурацилина:

Реактив	Аналитический эффект реакции
Раствор едкого натра*)	оранжево-красное окрашивание
Растворы едкого натра и йода**^)	оранжево-красное окрашивание и выделение аммиака
Ацетон и едкое кали	устойчивое серно-красное окрашивание
Диметилформамид	желтое окрашивание
Диметилформамид и едкое кали	фиолетовое окрашивание, на стенках пробирки – фиолетово-красное

Цветные реакции на фурацилин:

95% этиловый спирт, 10% р-р CuSO4	темно-красное окрашивание и осадок
10% р-р NaOH, пергидроль и 30% р-р едкого натра	бледно-желтое окрашивание
95% этиловый спирт и 5% р-р нитропруссида натрия	красное окрашивание и осадок
реактив Несслера	красновато-коричневое окрашивание и осадок

Количественное определение. Фурацилин определяют фотометрическим и иодометрическим методами.

1.Фотометрическое определение по естественной окраске раствора методом стандартов.

Методика определения

1).Приготовление стандартного раствора фурацилина.

Для приготовления стандартного раствора 0,0200 г фурацилина, растворяют в 70-80 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане при 70-80⁰С. После охлаждения объем раствора доводят водой до метки и хорошо перемешивают.

2) Определение концентрации фурацилина в лекарственной форме.

К 0,5 мл лекарственной формы прибавляют 7,5 мл воды, 2 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия и перемешивают.(V₁=10мл) Через 20 минут измеряют оптическую плотность окрашенного раствора (D₁) с помощью фотоколориметра в кювете с длиной рабочего слоя 1 см при синем светофильтре (390-400 нм). В качестве раствора сравнения используют воду. Параллельно проводят реакцию с 0,5 мл 0,02%-ного стандартного раствора фурацилина и измеряют оптическую плотность полученного раствора (D_ст.)

Содержание фурацилина (%) вычисляют по формуле:

ω (C₆H₆N₄O₄) = D₁· 100 / D_ст. 0,5·1000,%

2. Иодометрическое определение

Фурацилин определяют методом обратного иодометрического титрования. В щелочной среде иод образует гипоиодид, который реагирует с фурацилином. После окончания процесса окисления раствор подкисляют. Выделившийся избыток иода оттитровывают тиосульфатом натрия.

Методика определения

1) Около 0,1 г препарата (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл, для улучшения растворимости прибавляют 4г хлорида натрия, 300мл воды и растворяют при подогревании до 70-80⁰С на водяной бане. Охлажденный раствор доводят до метки и перемешивают.

2) К 5 мл 0,0100н раствора иода (V₁)., помещенного в колбу для титрования вместимостью 50 мл, прибавляют 0,1 мл раствора гидроксида натрия и 5 мл испытуемого раствора. Через 1-2 минуты к раствору прибавляют 2 мл разведенной серной кислоты и выделившийся иод титруют из микробюретки 0,0100н раствором тиосульфата натрия (V₂).. Когда раствор приобретет соломенно-желтый цвет, прибавляют 1% раствор крахмала и продолжают титровать до исчезновения синей окраски раствора. Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,0100н раствора иода соответствует 0,0004954 г фурацилина

Расчет содержания фурацилина проводят по формуле:

Х₍ C₆H₆N₄O_{4 )}=

W - объем мерной колбы, в которой производили разведение;

а - объем раствора, взятый для анализа (аликвота);

V₁ - объем титрованного раствора J₂, добавленного до начала титрования;

V₂ - объем титрованного раствора J₂, израсходованного на титрование, мл;

Т -титр по определяемому веществу - масса определяемого вещества, соответствующая 1мл титрованного рабочего раствора, г/мл;

Н - навеска или объем лекарственной формы.

К₁ и К₂ -коэффициенты поправки титрованных растворов (К =1, если концентрация раствора равна 0.1000н).

Примечание: Содержание фурацилина в препарате должно быть не менее 97,5%

.

6.6. Анализ двухкомпонентной порошковой лекарственной формы без разделения.

Лабораторная работа №7 А нализ порошков состава:

Кислоты аскорбиновой 0.02; 0.05; 0.1; 0.2.

Глюкозы 0.2; 0.25; 0.3; 0.4.

Цель работы: Оценка качества сложной анализируемой лекарственной формы без разделения ингредиентов.

1.Кислота аскорбиновая (витамин С). С₆Н₈О₆ М.масса 176,13 г/моль

Структура аскорбиновой кислоты может быть представлена двумя таутомерными формулами:

Кислотные свойства кислоте аскорбиновой придает наличие в молекуле двух енольных радикалов. В разбавленных растворах щелочей она ведет себя как одноосновная кислота.

Эта реакция лежит в основе определения аскорбиновой кислоты методом нейтрализации.

Кислотные свойства кислоты аскорбиновой используют также для испытания подлинности. После добавления карбоната натрия в водном растворе происходит образование натриевой соли кислоты аскорбиновой, которая с сульфатом железа (Ш) образует соль темно-фиолетового цвета. Окраска исчезает после добавления разведенной серной кислоты.

Подлинность: Подлинность аскорбиновой кислоты устанавливают также реакцией «серебряного зеркала», потому что она проявляет восстановительные свойства, окисляясь до дегидроаскорбиновой кислоты.

Выполнение реакции.

0.005 – 0.01г препарата растворяют в капле воды, прибавляют каплю раствора нитрата серебра, образуется темно – серый осадок металлического серебра.

2.Глюкоза С₆Н₁₂О₆ Н₂О М. масса. 98,17г/моль

Структура глюкозы может быть представлена двумя формулами:

Подлинность. Подлинность глюкозы устанавливают по реакциям альдегидной группы: реакцией «серебряного зеркала (1) или реакцией с сульфатом меди в щелочной среде (2), после разрушения аскорбиновой кислоты действием 30% раствора Н₂О₂ и аммиака.

Выполнение реакций

0.05 – 0.1г порошка растворяют в 1 – 2 мл воды, прибавляют по 2 –3 капли пергидроля и аммиака и кипятят 2 – 3мин. После охлаждения проводят реакции на глюкозу (1) и (2).

1) При добавлении сульфата меди и подщелачивании глюкоза образует комплексное соединение фиолетово-синего цвета. Эта реакция одновременно доказывает наличие как гидроксильных, так и альдегидной, (восстанавливающей медь при стоянии) групп..

2) 0.01 г препарата растворяют в 1 мл воды, прибавляют 1 – 2 капли нитрата серебра, 2 – 3 капли раствора аммиака и нагревают, выделяется металлическое серебро в виде зеркала или серого осадка.

Дата добавления: 2017-02-01