Вирусология бойынша дәріс

Слайд 1:

  Сәлеметсіздер ме құрметті тыңдармандар мен көрермендер! Біз «Вирусология» курсын оқуды жалғастырамыз. Бұл курста біз вирусты зерттеу әдістерін қарастырамыз.

Слайд 2:

Бұл дәрісте біз мыналарды қарастырамыз:

1. Тауық эмбриондарында вирустардың өсу

2. Зертханалық жануарлар организмінде вирустардың өсуі

3. Жасуша дақылдарында вирустардың өсуі

       Слайд 3:

Вирологиялық зерттеулер үшін 7 жастан 12 күнге дейінгі тауық эмбриондары қолданылады. Тауық эмбриондарын жұқтыру әдістері әртүрлі болуы мүмкін: материалды хорион-аллантотық мембранаға енгізу, оны амниотикалық және аллантикалық қуыстарға немесе сарысы қабына енгізу.

Инфекция әдісін таңдау вирустың биологиялық қасиеттеріне байланысты. Вирус тауық эмбрионында ұрықтың қайтыс болуымен, стаканға аллантикалық немесе амниотикалық сұйықтықпен гемагглютинацияның оң реакциясы және хорион-аллантикалық мембранада фокалды зақымданудың («бляшкалар») пайда болуымен көрінеді.

      Эмбрион амниотикалық қуысты толтыратын амниотикалық сұйықтыққа батырылады және кіндік арқылы сарысумен байланысады. Сондай-ақ, сарысу эксцентрлік және эмбрионға қатысты бойлық осьтің екінші жағында орналасқан сияқты. Тікелей қабықшаның қабығында амнион мен сарысы қабын жабатын аллантикалық қуыс болады, ал 10-11-ші күні жұмыртқаның өткір ұшында жабылады. Даму процесінде аллантикалық мембрана хорионмен бірігіп, бір хорионаллантотық мембрана (САО) құрайды. Жұмыртқаның өткір ұшында ақуыздың қалған бөлігі жатыр.Вирустың таралуы эмбрион, HAO және сарысы қабын қамтитын жасушалық құрылымы бар эмбрионның барлық құрылымдарында мүмкін. Вирустардың жинақталуы сол құрылымдарда болады, бірақ бірқатар вирустар аллантоидтық және амниотикалық сұйықтықтарда жиналып, вирустың дерлік дайын суспензиясын құра алады. Эмбрионның бір немесе басқа бөлігінде инфекция сезімтал жасушалардың саны неғұрлым көп болатын ең жоғарғы даму кезеңінде жүзеге асырылады. Инкубация кезінде эмбрионалды құрылымдардың мөлшері өзгереді, бұл көбінесе олардың функционалды мақсатымен түсіндіріледі және инфекцияға оңтайлы болатын эмбрионның жасын анықтайды. Қоректік заттардың резервуары ретіндегі сарысы қабығы инкубацияның басында ең көп көлемге ие болады, содан кейін (12-ші күннен кейін) эмбрионның дамуы кезінде ол азаяды. Инкубацияның 5-ші күнінен 7-ші күніне дейін сарысы қапшығына инфекция жасаңыз. Амниотикалық қуыс эмбрионның дамуы үшін буферлік орта бола отырып, оны инкубацияның 5-ші күнінен бастап жабады. Инкубациялық кезеңнің ортасына қарай сұйықтықтың орташа мөлшері шамамен 1 мл құрайды. Амниотикалық қуысқа жұқтыру үшін 6-10 күндік эмбриондар қолданылады. Аллантикалық қуыс метаболизм өнімдерін жинауға қызмет етеді, құрамында несеп қышқылы тұздары, фосфор және азот қосылыстары жиналады.Эмбрионның өсуі мен дамуы процесінде аллантикалық сұйықтық қышқылдық реакцияға ие болады. Аллантикалық қуыс эмбрионның дамуының 9-12-ші күнінде максималды мөлшеріне жетеді, сондықтан аллантикалық қуыста инфекция негізінен инкубацияның 9-11-ші күнінде жүзеге асырылады. Корионаллантотық мембрана қан тамырларына бай, олар кеуекті қабықтың ішкі бетіне жақын орналасқан, оттегімен қаныққан және эмбрионның тыныс алу мүшелерінің қызметін атқарып, оларды эмбрион денесімен қамтамасыз етеді. HAO максималды дамуы 11-13-ші күнде жетеді. Корионаллантотық мембранаға инфекция инкубацияның 10-12-ші күнінде жүзеге асырылады.

Слайд 4:

 Эмбриондар инкубатордан жеткізіліп, олардың транзит кезінде салқындауына жол бермейді. Зертханада эмбриондар термостатта 37 ° C температурада және 60-70% ылғалдылықта инкубацияланады, бұл термостатта ашық кең мойынды ыдыстарды сумен орнату арқылы қол жеткізіледі. Инфекциядан бұрын эмбрионның өміршеңдігі овоскопия арқылы анықталады. Овоскопия - бұл жұмыртқаны жеткілікті жарық шамымен (овоскоппен) сканерлеу, нәтижесінде қабықтың жарылмаған жағында ішкі құрылымдардың көлеңкелері пайда болады.Тірі эмбриондар овоскопия кезінде қозғалмалы белсенділік көрсетеді, тамырлы құрылым айқын көрінеді.Қарапайым қарындаш ауа камерасының шекарасын, эмбрионның орналасқан жерін және 0,5х0,5 см өлшеуіш тамыр аймағын сипаттайды.Осы белгілер вирусты қамтитын материалды енгізу орнын таңдау кезінде нұсқаулық болады. Тауық эмбриондары стерильді құралдарды қолданып, әуе кеңістігінде қабықты йод пен алкогольмен алдын-ала өңдеп, асептикалық жағдайда вирусы бар материалды жұқтырады.

Слайд 5:

 Эмбриондарды жұқтырудың алты әдісі бар. Көбінесе инфекция аллантикалық қуыста және хорионаллантикалық қабықта, амниотикалық қуыста және сарысы қабында, сирек эмбрион денесінде және ОАО қан тамырларында сирек қолданылады. Әдісті таңдау вирустың тропизмімен, сондай-ақ инфекцияның мақсатымен анықталады. Кез-келген инфекция әдісімен 0,1-0,2 мл инфекциялық материал жіберіледі.

Осы әдіспен жұқтырған кезде тұмау, Ньюкасл ауруы, жылқылардың ринопневмониясы, везикулярлық стоматит және басқалары жақсы көбейеді.Әдістің бірнеше нұсқалары бар. Бірінші нұсқа. Эмбрион тік күйінде тік ұшымен аяқталады. Диаметрі 1 мм болатын тесік эмбрионның бүйіріндегі қабықта, кейде эмбрионға қарама-қарсы жақта, ауа камерасының шекарасынан 5-6 мм жоғары орналасқан. Ине бойлық осіне 10-12 мм тереңдікке параллель енгізіледі.

Екінші нұсқа. Ауа камерасының үстіндегі қабықта тесік тек ауаның бір бөлігін босату үшін қолданылады. Инфекцияға арналған тесік хорионаллантотық мембрананың (CAO) эмбрионның жағында орналасқан. Ине 2-3 мм-ден аспайтын тереңдікке енгізіледі. Жұқпалы сұйықтық 0,1-0,2 мл көлемінде енгізіліп, тесік парафинмен жабылады.

Слайд 6:

Тауық эмбриондарын жұқтырудың бұл әдісі көбінесе шешектің эпителиалды және пантропты вирустарын, құстардың жұқпалы ларинготрахеитін, жұқпалы оба, Ауески ауруы, қойдың катаральды безгегін және басқаларын өсіру үшін қолданылады. Мұндай инфекцияны табиғи немесе жасанды ауа камерасы арқылы жасауға болады. Табиғи ауа камерасы арқылы жұқтыру үшін эмбрион тігінен ұшымен штативке орналастырылады және диаметрі 15-20 мм дөңгелек терезе ауа камерасының ортасына қарсы кесіледі. Қабықша қабығы пинцетпен алынады.0,2 мм вирустық суспензия ОАО-ның әсер ету аймағына қолданылады, тесік жабысқақ таспамен жабылады немесе, әдетте, әйнекпен жабылып, оны балқытылған парафинмен нығайтады.

Жасанды ауа камерасы арқылы жұқтыру біріншіге қарағанда жиі қолданылады, өйткені ол вирусы бар материалдың ОАО беткейімен жанасуын қамтамасыз етеді, сондықтан вирустың көбірек мөлшерінің пайда болуына әкеледі. Осы әдіспен эмбрионды жұқтыру үшін ол эмбрионды жоғары қаратып штативке орналастырылады.

  Қабықта екі тесік жасалады: біреуі ауа камерасының ортасынан кішкене (одан ауаны соруға арналған), ал екіншісі - эмбрионның бүйірінен диаметрі 0,2-0,5 см. Әдістің күрделілігі мынада, екінші тесікті жасай отырып, алдымен қабықтың бір бөлігін мұқият алып тастау керек, содан кейін жылжымалы қозғалыспен САО-ны зақымдамай, ауаның пайда болған ақаудан өтуі үшін қабықтың қабығын жағына қарай жылжытыңыз. Осыдан кейін, резеңке шаммен ауа бірінші тесік арқылы табиғи ауа камерасынан шығарылады.Нәтижесінде сыртқы ауа бүйірлік саңылаудан өтіп, жасанды ауа камерасын құрайды, оның төменгі жағы ОАО болып табылады. Жұқпалы сұйықтық CAO бетіне бүйірлік саңылау арқылы жағылады және саңылау жабысқақ сылақтың көмегімен жабылады. Бірінші тесікті жабудың қажеті жоқ, өйткені қабықша қабықшасының ішкі жапырағы бұл инфекция әдісімен бұзылмаған және қоршаған орта микрофлорасына тосқауыл болып қала береді. Осы әдіспен жұқтырған эмбриондарды одан әрі инкубациялау көлденең қалыпта бүйір тесікпен жоғарыда жүргізіледі.

Слайд 7:

Сарысы қабығындағы инфекция. Көбінесе олар оны хламидиозды, сондай-ақ Марек ауруының вирустарын, жылқы ринопневмониясын, қойдың катаральды безгегін және т.б. тарату үшін пайдаланады. 5-7 күндік, кейде 2-3 күндік эмбриондар (RIF алқабын безгегі вирусы) жұқтырады. Инфекцияның екі түрі қолданылады. Бірінші нұсқа. Эмбриондар штативке тік күйде орналастырылған. Ауа камерасының ортасынан жоғары қабықта тесік жасалады және ине эмбрион орналасқан жерге қарама-қарсы бағытта тік оське 45 ° бұрышпен 3,5-4 см тереңдікке енгізіледі (7-сурет). Екінші нұсқа. Кейде ұқсас инфекция жолы штативтегі горизонтальды эмбриондарда жүзеге асырылады; ал эмбрион төменде, ал сарысы оның үстінде. Қабықтың тесігі балқытылған парафинмен жабылған (4-суретті қараңыз).Амниотикалық қуыста инфекция. Ол үшін 6-10 күндік эмбриондарды қолданыңыз. Бұл әдіс тұмау вирусын, Ньюкасл ауруын, аталық ринопневмонияны және т.б. өсіруде қолданылады. Инфекцияның екі әдісі бар. Жабық жол. Инфекция қараңғыланған қорапта жүргізіледі. Жұмыртқаны эмбрион горизонталь жерде овоскопқа орналастырады. Ауа камерасының үстіндегі қабықтағы тесік арқылы эмбрионның ішіне ұшы бар ине енгізіледі. Иненің амнионға енгенінің дәлелі - эмбрион денесінің қозғалыс бағытында қозғалуы. Ашық жол. Ауа камерасының үстіндегі қабық кесіліп, диаметрі 1,5-2,5 см болатын терезе пайда болады.Оның көмегімен қабық қабығы пинцетпен көздің бақылауымен алынады. Содан кейін жабық жақтары бар анатомиялық пинцет, хорионаллантикалық мембрананы эмбрионға қарай итереді. Пинцет оған жеткенде, бұтақтар ашылып, амниотикалық мембрананы САО-мен бірге ұстап, терезеге тартыңыз. Пинниді амнион қабығымен ұстап тұрып, құрамында вирус бар материал енгізіледі. Содан кейін барлық қабықшалар түсіріліп, терезе жабысқақ лентамен жабылады және эмбрион тік қалыпта инкубацияланады.Тауық эмбриондарын эксперименттік жұқтырудың сипатталған әдістері жалғыз емес, бірақ олардың әртүрлі нұсқалары бар.

Слайд 8:

Бейне «Тауық эмбрионының инфекциясы»

Слайд 9:

Тауық эмбриондарының зертханалық жануарларға қарағанда бірнеше артықшылығы бар: 1) қабық және қабықша қабығы эмбрионды сыртқы ортадан бактериялық инфекциядан сенімді қорғайды; 2) эмбриондардың маңызды артықшылығы сонымен қатар олардың вирустың кең спектріне жоғары сезімталдығы болып табылады, бұл қорғаныш механизмдерінің жеткіліксіз дамуымен түсіндіріледі; 3) тауық эмбриондары - құс фабрикалары мен балапандардың кең желісінің дамуына байланысты оңай қол жетімді объект; 4) тауық эмбриондары үнемді, күтімді және тамақтандыруды қажет етпейді.Негізгі кемшіліктер: 1) осы тірі жүйенің стерилдігіне толық кепілдік бере алмау, өйткені эмбриондарда вирустар мен басқа патогенді агенттер болуы мүмкін (тауықтың жұқпалы бронхит вирусы, Ньюкасл ауруы, тұмау, лейкемия, хламидиоз және микоплазма). Олардың болуы зерттеу нәтижелерін бұрмалауы мүмкін; 2) тауық эмбриондары барлық вирустарға сезімтал емес.

Дата добавления: 2023-10-06