Слайд 10 Құс эмбриондарын жұқтыру әдістері?

Слайд 11:

Жануарларды мекендейтін жүйелер вирусологияда өз қолданылуын табады:In vitro-да тиімді зерттелмейтін вирустарды шығарыңыз (мысалы, В гепатиті вирусы).

■ Вирустық инфекциялардың патогенезін зерттеңіз (мысалы, Coxsackie вирустары).

■ Вакцинаның қауіпсіздігін тексеріңіз (мысалы, ауыз қуысына полиовирустық вакцина).Алайда, олар келесі себептерге байланысты алынып тасталады:

■ Патогендік вирусты жұқтырған жануарларды өсіру және ұстау қымбатқа түседі. ■ Жануарлар - күрделі жүйелер, оларда кейде оқиғаларды ажырату қиын.

■ Нәтижелер әрқашан хосттың өзгеруіне байланысты шығарыла бермейді.

■ Эксперименттік жануарларды қажетсіз немесе ысырап ету моральдық тұрғыдан төзбейді.

■ Оларды «заманауи ғылым» - жасуша мәдениеті және молекулалық биология тез басып қалады.

 Тәжірибелік жануарларды таңдау жұмыстың мақсаты мен зерттелетін вирусқа түрдің сезімталдығымен анықталады. Маймылдар, қояндар, гвиней шошқалары, хомяктар, ақ егеуқұйрықтар мен тышқандар инфекцияны жұқтыру үшін қолданылады. Зертханалық жануарлар вирустың белгілі бір тіндерге тропизміне байланысты әртүрлі жолмен жұқтырылады. Мәселен, мысалы, нейротропты вирустарды өсіру үшін инфекция негізінен миға (құтыру вирустары, кене энцефалиті және т.б.), респираторлық вирустар жануарлардың интраназальды инфекциясы (тұмау вирустары), дерматотропты вирустар (сирек вирусы) кесек және ішілік инфекциялар арқылы өсіріледі.Көбінесе кең таралған: кесінді, интрадермальды, бұлшықет ішілік, ішілік және ішек ішілік инфекция. Бастапқы инфекция кезінде жануарлар ауырмауы мүмкін, сондықтан 5-7 күннен кейін сау жануарлар эксперименттен шығарылады және олардың мүшелерінен суспензиялар дайындалады, олар келесі жануарлардың партияларын жұқтырады. Бұл дәйекті инфекциялар «өту» деп аталады.

Көрсету, б.а. Вирустың көбею фактісін анықтау аурудың типтік белгілерін, жануарлар ағзалары мен тіндеріндегі патоморфологиялық өзгерістерді немесе гемагглютинацияның оң реакциясын (RGA) негізге алады. RGA кейбір вирустардың беткі вирустық ақуыз - гемагглютининнің әсерінен әртүрлі жануарлар, құстар мен адамдардағы эритроциттердің эритроциттердің қоздырғыштығын (желімдеуін) туғызу қабілетіне негізделген.

Слайд 12:

Өсімдіктер мен жануарларды пайдалану өсімдіктер вирустарын зерттеуде маңызды рөл атқарады, дегенмен мұндай жүйелер кейде нәтижеге қол жеткізуге баяу және оларды ұстау қымбатқа түседі. Соңғы жылдары вирустардың қабылдаушы организмдерге әсерін зерттеу үшін мүлдем жаңа технология қолданыла бастады. Бұған вирустық геномның барлығын немесе бір бөлігін эксперименттік ағзаның ДНҚ-ға енгізу арқылы трансгенді жануарлар мен өсімдіктерді құру кіреді, бұл вирустың және ақуыздардың соматикалық жасушаларда (және кейде ұрық тәрізді жасушаларында) көрінуіне әкеледі. Осылайша, вирустық ақуыздардың патогендік әсерін жеке және әртүрлі комбинацияларда тірі қожайындарға зерттеуге болады. SCID тышқандары (Ауыр аралас иммун тапшылығы) жануарлардың иммунды жетіспейтін жолдарынан адам тіндері трансплантацияланды. Бұл тышқандар адамның иммун тапшылығы вирусының (АИТВ) патогенезін зерттеудің қызықты моделін құрайды, өйткені бұл маңызды вирустың қасиеттерін in vivo-да зерттеудің нақты баламасы жоқ.

Бүгінгі таңда BLT моделі АИВ-1 және вирусқа қарсы препараттарды скринингтік механизмдерді зерттеу үшін ең сәтті болып саналады. BLT моделі тінтуірді АИТВ-пен жұқтыруға ғана емес, сонымен қатар осы инфекцияның иммунопатогенезін дәл модельдеуге және, демек, жаңа препараттардың мақсаттарын дұрыс қоюға мүмкіндік береді.

13 слайд:

SCID-hu"тышқандарының бейнебаяны «

14-слайд:

Биосынама алу үшін табиғи сезімтал және зертханалық жануарларды іріктеудің негізгі ережелері қандай?

15 слайд:

Жасуша дақылдары ХХ ғасырдың басында бүкіл органикалық дақылдармен бірге қолданыла бастады, содан кейін бір клеткаларды немесе бастапқы клеткалық культураларды (тәжірибелік жануардың соматикалық клеткалары немесе мәдениеттен қысқа мерзімде сақтауға болатын адамдардан алынған) немесе өліге қалдырылған жасушалармен байланысты әдістерге көшті. тиісті жағдайларда мәдениетте шексіз өсетін сызықтар. 1949 жылы Джон Эндерс және оның әріптестері адам жасушаларының бастапқы мәдениеттерінде полиовирусты тарата алды. Бұл жетістік көптеген адамдар «вирусологияның алтын ғасыры» деп атаған кезеңнің бастауын белгілеп, 1950-1960 жж. Көптеген вирустарды анықтап, оқшаулауға және олардың адам ауруларымен - мысалы, көптеген энтеровирустар мен респираторлық вирустармен, мысалы, аденовирустар. Вирустардың кеңінен оқшаулануы субклиникалық вирустық инфекциялар өте жиі кездесетінін түсінуге алып келді; мысалы, ең вирустық полиовирустық штаммдардың эпидемиясында да полиомиелиттің әр паралитикалық жағдайы үшін шамамен 100 субклиникалық инфекция бар. Ренато Дульбекко 1952 жылы алғаш рет жануарлардың вирусын бляшкалық анализді қолдана отырып дәл анықтады. Бұл әдіспен вирустың ерітіндісі мәдениетті жасушалардың бір қабатын жұқтыру үшін қолданылады, ол вирустың таралуын шектеу үшін жұмсақ агармен жабыстырылады, бұл бір қабатын бояғаннан кейін жергілікті клеткалардың өлуіне және бляшкалардың пайда болуына әкеледі. Бляшкалардың санын есептеу табаққа салынған инфекциялық вирустық бөлшектердің мөлшерін тікелей анықтайды. Дәл осы әдісті биологиялық тұрғыдан вирусты клондау үшін де қолдануға болады (яғни, таза форманы түрлер қоспасынан оқшаулау). Бұл әдіс бірнеше уақыт бойы агар пластиналарындағы бактериялық жасушалардың тұрақты «көгалдарына» қолданылатын бактериофагтардың суспензиясындағы жұқпалы вирустық бөлшектердің санын анықтау үшін қолданылды, бірақ оны эукариотты вирустарға қолдану вирустың репликациясын зерттеуде тез алға жылжуға мүмкіндік берді. Тақта талдаулары негізінен ертерек соңғы сұйылту әдістерін алмастырды, мысалы, культурадағы вирустық популяцияны өлшеу үшін статистикалық құрал болып табылатын тіндердің культурасын талдаудың (TCID50) инфекциялық дозасы; дегенмен, соңғы нүктелер әдісі белгілі бір жағдайларда, мысалы, мәдениетте қайталанбайтын немесе цитопатиялық және бляшкалар шығармайтын вирустар үшін қолданыла алады (мысалы, адамның иммун тапшылығы вирусы).

16 слайд:

Адамдардың, жануарлардың, құстардың немесе басқа биологиялық нысандардың әртүрлі мүшелері мен тіндерінен алынған жасушалар арнайы зертханалық шыны ыдыста жасанды қоректік ортада денеден тыс көбейе алады. Ересек ағзаның қалыпты жасушаларына қарағанда белсенді өсу және көбею қабілеті бар эмбриональды және қатерлі тіндердің жасушалары культуралары өте кең таралды. Дайындау техникасына байланысты жасуша дақылдарының үш типі бөлінеді:

• бір қабатты - химиялық бейтарап әйнек зертханалық шыны ыдыстың бетіне монолайер түрінде қосыла алатын және көбейе алатын жасушалар;

• суспензиялық - тұрақты араластырумен қоректік ортаның бүкіл көлемінде көбейетін жасушалар;

• мүшелік - денеден тыс бастапқы құрылымды сақтайтын мүшелер мен тіндердің тұтас бөлігі (шектеулі қолдану).

Өмірге қабілетті ұрпақ санына сәйкес жасуша дақылдары келесіге бөлінеді:

• бастапқы, тек алғашқы ұрпақтарда көбейе алады, яғни ұлпалардан оқшауланғаннан кейін бірнеше үзінділерде;

• тұрақты немесе тұрақты, зертханада белгісіз ұзақ мерзімге көбейтуге қабілетті;

• жартылай ауыстырылатын, өмір сүру мерзімі шектеулі (40 - 50 өту).

17 слайд:

Бастапқы жасуша культурасын дайындау бірнеше келесі кезеңдерден тұрады: ұлпаларды тегістеу, трипсинизация әдісімен жасушаны бөлу, оқшауланған жасушалардың трипсиннен біртекті суспензиясын жуу, содан кейін қоректік ортадағы жасушалардың суспензиясы.

Трансплантацияланған бір қабатты жасуша культуралары белгілі бір жағдайларда ұзақ уақыт бойы in vitro-да көбейе алатын қатерлі немесе қалыпты жасушалық желілерден дайындалады. Оларға бастапқыда жатыр мойны карциномасынан оқшауланған HeLa қатерлі жасушалары, Hep - 3 (лимфоидты карциномадан), сондай-ақ адамның қалыпты амнион жасушалары, маймыл бүйректері және т.б.

Жартылай трансплантацияланатын дақылдарға адамның диплоидты жасушалары кіреді. Олар 50 өту (бір жылға дейін) процесінде хромосомалардың диплоидтық жиынтығын сақтайтын жасушалық жүйе. Адамның диплоидты жасушалары қатерлі дегенерацияға ұшырамайды және бұл ісік жасушаларына қарағанда жақсы.

Кез-келген түрдегі тіндік дақылдарды вирустың өсуіне қолдануға болады. Инфекцияның дозасы тәжірибенің мақсаты мен мақсатына байланысты. Тіндік дақылдар жаңа белгілі аз вирустарды оқшаулау үшін қолданылады, әдетте патогеннің вирустық табиғатын әдеттегі әдіспен (жануарлардың, тауық эмбриондарының инфекциясы) анықтау мүмкін болмаған кезде қолданылады. Жасушалық дақылдарды таңдау олардың вирустардың жекелеген топтарына сезімталдығымен анықталады.

Жедел және созылмалы инфекцияларды ажыратыңыз. Инфекцияның өткір ағымы цитопатиялық әсермен сипатталады (жұқтырған жасушалардағы деструктивті өзгерістер, олардың өліміне әкеледі). Вирустың көбеюінің созылмалы түрі жасушалардың тез өліміне әкелмейді, олар ұзақ уақыт өміршең болып қалады және жұқтырған жасушалардан өзгеше болмауы мүмкін.

18 слайд:

Пайдасы

• Бастапқы клеткаларды қолдану жануарлар эксперименттеріне көптеген этикалық қарсылықтарды болдырмайды. Адамның ұлпаларына эксперимент жүргізуге мүмкіндік береді, бұны басқаша түрде in vivo.

• Бастапқы жасушаларды қолдану ұяшықтар сызығынан гөрі маңызды нәтижелер береді. Алдын-ала таңдалған бастапқы ұяшықтар vivo сигналын өте дәл көрсетуге жақсы модель болып табылады.

• Бастапқы жасушалар үнемді, өйткені олар in vivo зерттеулерінде қажет жануарлардың модельдерінің құнын төмендетуге көмектеседі.

кемшіліктері

• Бастапқы жасушалар басқа жасушалық сызықтарға қарағанда көбірек өседі және оңтайлы өсу жағдайларында да шектеулі өсу потенциалы бар және ақырында қартайып өледі.

• Әр түрлі донорлардан алынған жасушалар қабынуға қарсы цитокиндерге жауап ретінде басқаша әрекет етеді (егер олар алдын-ала тексерілмеген болса). Виво жағдайында болатын метаболикалық реттеу механизмінің өсуі өсіру жағдайында болмайды.

Оқшаулау және өсіру құны көбінесе жануарларға қарағанда арзан болғанымен, өте жоғары және тыйым салынады. Мата мәдениеті әрдайым мүмкін бола бермейді. Егер оңтайлы культура жағдайлары сақталмаса, бастапқы жасушалардың сипаттамалары әр келесі өту арқылы өзгеруі мүмкін.

19 слайд:

Жасуша культурасында вирустарды анықтау келесі құбылыстардың негізінде жүзеге асырылады:

• Цитопатикалық эффект (ЦРД) - вирустардың жасушааралық көбеюі нәтижесінде пайда болатын, микроскопта көрінетін жасушалардың әйнектен бас тартуына дейінгі морфологиялық өзгерістері. Әр түрлі вирустық инфекциялардағы ЦПС-нің табиғаты әртүрлі болады. Кейбір вирустардың көбеюі кезінде (парамиксовирустар, герпес вирустары), синцитийдің пайда болуымен жасуша синтезі байқалады, басқалары (энтеровирустар, реовирустар) - жасушалардың мыжылуы және жойылуы, үшінші (аденовирустар) - жасушалардың жинақталуы және т.б.

• Вирустық қосылыстар - вирустық бөлшектердің немесе вирустың жеке компоненттерінің цитоплазмада немесе жасуша ядросында жиналуы, микроскоптың көмегімен арнайы бояумен микроскоппен анықталады. Қосулар мөлшері, пішіні, саны бойынша өзгереді. Типтік ядролық қосылыстар герпес вирусы, аденовирустар, тұмау, құтыру, шешек және т.б. жұқтырған жасушаларда пайда болады.

• Бляшкалар немесе теріс колониялар дегеніміз - агар жамылғысы астында жасушалардың монолярлы қабатында вирустар түзе алатын дегенеративті жасушалардан тұратын шектеулі аймақ. Олар көзге көрінбейтін, нейтралды қызыл түсті жасушалардың ішіне боялған жарық дақтары сияқты көрінеді. Бір тақта бір вирионның ұрпағына сәйкес келеді. Әр түрлі вирустың теріс колониялары мөлшері мен формасында ерекшеленеді. Бляшек қалыптастыру вирустарды саралау, іріктеу, сондай-ақ сынақ материалындағы олардың концентрациясын анықтау үшін қолданылады. Осы әдіспен орнатылған вирус титрі 1 мл-де бляшкаларды түзетін бірліктердің саны (PFU) түрінде көрінеді.

• «Түс» сынағы. Егер вирустар жасуша культурасында көбеймесе, онда метаболизм процесінде тірі жасушалар қышқыл өнімдерді бөліп алады, бұл фенолдың қызыл индикаторының рН мен түсінің сарыға өзгеруіне әкеледі. Вирустарды шығару кезінде қалыпты жасуша алмасуы бұзылады, жасушалар өледі, ал орта өзінің бастапқы (қызыл) түсін сақтайды. Осылайша, ортаның қызыл түсі вирустың болуын және жасуша белсенділігінің тоқтатылуын білдіреді.

Гемадсорбция - вирусты жұқтырған жасуша дақылдарының олардың бетіндегі белгілі бір жануарлар мен құстардың эритроциттерін адсорбциялау қабілеті. Гемадсорбция вирус жұқтырған жасушаларға адсорбцияланған қызыл қан клеткаларының кластері түріндегі кластермен көрінеді.

• Кедергі - бір вирустың (немесе оның компоненттерінің) басқа вирустың көбеюіне және сол арқылы туындаған инфекцияға кедергі жасайтын вирустардың өзара әрекеттесуі.

20 слайд:

Денеден оқшауланған жасушаларды өсіру үшін қандай жағдайлар қажет?

21 слайд:

Шолу сұрақтары:

• Инфекция техникасы, инфекциялық материалды енгізу әдістері?

• Вирустың құс эмбриондарының әртүрлі тіндеріне әсері?

• Вирустық агент әсерінен зертханалық жануарлардың тіндеріндегі патологиялық өзгерістер?

Жасуша культурасын дайындауға арналған ерітінділер мен культуралық медиа?

• Вирустардың жасушаларға цитопатикалық әсері, цитопатиялық әсер түрлері?

Слайд 22

Пайдаланылған әдебиеттер:

• Fields Virology. Edited by B.N. Fields, D.M. Knipe, P.M. Howley. Lippincott-Raven Publishers. Philadelphia-New York. 2001, 2006 (ипоследующиеизданияэтойкниги).

• https://www.who.int/ru

• http://stat.gov.kz/

• https://lib.enu.kz/?q=ru/node/9

• https://www.scopus.com/home.uri

• https://link.springer.com/

• http://login.webofknowledge.com/

• “All Virology on the WWW”: www.virology.net

• https://www.youtube.com/watch?v=N6qjAAbXLDQ

• https://slideplayer.com/slide/8972332/

• https://www.google.kz/imgres?imgurl=https%3A%2F%2Fslideplayer.com%2Fslide%2F8972332%2F27%2Fimages%2F18%2FMethod%2Bof%2Bcultivation%2Bof%2Bviruses.jpg&imgrefurl=https%3A%2F%2Fslideplayer.com%2Fslide%2F89723

• https://www.slideshare.net/cud2018/virology-prac-microbiology

• google.kz/imgres?imgurl=https%3A%2F%2Fimage.slidesharecdn.com%2Fvirology-131209105953-phpapp01%2F95%2Fvirology-prac-microbiology-31-638.jpg%3Fcb%3D1386586875&imgrefurl=https%3A%2F%2Fwww.slides

• https://microbiologyinfo.com/techniques-of-virus-cultivation/

• http://www.kgau.ru/sveden/2017/ipbivm/metod_060301_5.pdf

• https://www.youtube.com/watch?v=2S3EKblu1mA

Дата добавления: 2023-10-06