Количество учебных часов - 3 часа. Кишечника. Материальное обеспечение

Кишечника. Материальное обеспечение.

Ll. Практическое занятие

ТЕМА: "Микробиологические исследования при дисбактериозе

1 день исследования"

Актуальность:

Накоплено много сведений о видовом составе микробов зева, носа, глотки, ротовой полости, влагалища, кишечника, кожи и других экотопах организма. Установлены нормативы содержания микрофлоры облигатной, факультативной, транзиторной. Описано участие микрофлоры в водно-солевом, газовом обмене, ее значение для процессов пищеварения, метаболизации белков, жиров, углеводов; способность микроорганизмов синтезировать биологически активные вещества, в частности, витамины, гормоны, антибиотики, иммуногенная роль микрофлоры, в том числе в формировании естественного иммунитета.

Однако, за последние годы во всех странах отмечается резкое увеличение удельного веса дисбактериозов у детей и взрослых, что связывают с ухудшением экологической обстановки, использованием антибиотиков, гормонов, ростом стрессовых ситуаций, снижением качества пищевых продуктов, воды и пр.

Проблема лечения и профилактики дисбактериозов в настоящее время приобрела большое значение в обеспечении здоровья населения, снижении общей заболеваемости и смертности, вместе с тем недостаточно проводится обучение практических врачей по проблемам клиники, микробиологической диагностики, лечения, профилактики дисбактериозов. Считают, что лечением этой патологии должен заниматься врач-терапевт, педиатр, инфекционист, имеющий специализацию по медицинской микробиологии.

Что же такое дисбактериоз? Определений понятия "дисбактериоз", а также терминов, обозначающих этот феномен, очень много. Дисбактериоз - это патологический процесс, являющийся дополнительным, а подчас ведущим звеном в патогенезе неспецифических заболеваний кишечника, при котором развиваются качественно-количественные сдвиги состава облигатной, факультативной микрофлоры. Изменения микрофлоры коррелируют с основными проявлениями болезни. Зачастую дисбактериоз развивается как следствие перенесенной инфекции, например, кишечной. Нередко же на фоне существующего дисбактериоза значительно чаще развивается инфекция.

Цель занятия:

Студент должен знать: что такое эубиоз (нормоценоз); значение нормальной микрофлоры для организма человека; нормативное содержание микрофлоры кожи, носа, носоглотки, ротоглотки, трахеи, бронхов, желудочно-кишечного тракта (пищевода, желудка, кишечника); мочеполовой системы; отличие состава микрофлоры ребенка от микрофлоры взрослых; факторы, способствующие развитию дисбактериоза; степени дисбактериоза, его клинические и бактериологические показатели; принципы лечения дисбактериоза.

Студент должен уметь: Осуществить забор фекалий для исследования на дисбактериоз кишечника; подготовить фекалии для десятикратных разведений в физиологическом растворе. Подобрать питательные среды для посева разведения фекалий на выяснение аэробных и анаэробных бактерий. Объяснить схему микробиологической диагностики на дисбактериоз кишечника.

Аннотация.

Для бактериологического исследования фекалий на дисбактериоз кишечника в первый день берут свежие фекалии от больного и доставляют в лабораторию в течение 1-2 часов; разводят в физиологическом растворе и засевают на специально подобранные дифференциально диагностические среды (рисунок 5).

Как видно на рисунке, все посевы производят количественным методом, для чего используют разведения фекалий и определенные посевные дозы.

Разведение фекалий - ответственный этап исследования, так как от него зависит правильность подсчета содержания в посевном материале тех или иных микробов, а это, в свою очередь, является основой установления степени выраженности дисбактериоза.

Для разведения берут 11-12 стерильных пробирок с 4,5 мл физиологического раствора. В стерильную ступку помещают 1 г фекалий, 9 мл стерильного физ. раствора и все тщательно гомогенизируют. Берут 2-х кубиковую пипетку, набирают 2 мл фекалий и производят следующие действия:

1. Посев 1 каплю на чашку со средой Рогозы

2. Вносят 0,5 мл в первую пробирку (из 11, поставленных в штатив)

3. Вносят 1,0 мл в первую пробирку со средой Сидоренко (среда Сидоренко еще называется СПН - среда полимиксин-неоциновая).

Остатки фекалий (разведения 10^-1) выливают в дезраствор и этой же пипеткой, последовательной разводят фекалии в среде Сидоренко, пипетку помещают в банку с дезраствором.

Затем берут вторую пипетку и с помощью груши хорошо перемешивают разведения (10^-2) фекалий в первой пробирке, засевают 1 каплю (10^-2) на среду Рогозы во 2-й сектор; 0,5 мл переносят во 2 пробирку (ряд разведений), хорошо перемешивают разведение фекалий (10^-3), капают на среду Рогозы в 3-й сектор чашки; переносят 0,5 мл в 3-ю пробирку и т.д. Затем засевают 0,1 мл из разведения 10^-2 на среду Сабуро.

Таким образом, с помощью второй пипетки последовательно разводят фекалии до 10^-6 и параллельно засевают 6 секторов среды Рогозы в чашке Петри. Пипетку (вторую) после использования помещают в дезраствор.

Затем берут третью пипетку, с помощью груши набирают 0,5 мл разведения фекалий 10^-6 и переносят в следующую (шестую) пробирку - готовят разведение 10^-7 до 10^-10 (10^-12). Затем берут 10 см³ пипетку и с помощью груши засевают фекалии в среду Блаурок (расплавленная, остуженная до 50^оС агаризованная среда). Используя одну пипетку, производят посев по 1,0 разведений фекалий, начинают с разведения 10^-11, затем 10^-10, 10^-9, 10^-8, 10^-7.

Рис. 5.

Затем стерильной пипеткой засевают по 0,1 мл фекалий разведения 10^-7 на чашки со средами: МПА, Эндо, Эндо с 3% крови, кровяной агар, ЖСА, висмут-сульфитный агар и агар Плоскирева.

Все чашки с посевами ставят в термостат на сутки при температуре 37^оС.

Пять пробирок со средой Сидоренко, пять пробирок со средой Блаурок, чашки со средой Рогозы, помещают в анаэростат (рост регистрируют через 3-5 дней)при температуре 37^оС.

Все посевы обязательно маркируют - указывают разведение фекалий и название среды.

Остатки фекалий, ступка, пипетки - дезинфицируется.

Самостоятельная работа студентов:

Материальное обеспечение занятия:

На столе у студентов должно быть (по числу студентов):

- пробирки с 4,5 мл физиологического раствора

- пробирки со средой Сидоренко

- пробирки со средой Блаурок

- среды в чашках (по 1 чашке каждой среды)

агар Рогозы

МПА

агар Эндо

агар Эндо с 3% бараньей крови

желточно-солевой агар

висмут-сульфит агар

кровяной агар

агар Сабуро

агар Плоскирева

- стерильные пипетки - 5,0.; 1,0 или 2,0

- стерильная фарфоровая ступка с пестиком

- шпатели

- проба фекалий

- стеклограф

- груша для пипетки

- спиртовки

Наглядные пособия:

Таблицы, схемы.

Практическая работа студентов:

1. Тренировка: работа с пипеткой и грушей

2. Приготовить взвесь фекалий в физрастворе (10^-1) в фарфоровой ступке

3. Развести фекалии в физрастворе: 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4, 10^-5, 10^-6, 10^-7, 10^-8, 10^-9,

10^-10, 10^-11

4. Засеять на чашку с агаром Рогозы по 1 капле следующих разведений фекалий:

10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4, 10^-5, 10^-6

5. Засеять 5 пробирок с 10 мл среды Блаурок по 1,0 взвеси фекалий в разведениях,

начиная с 10^-11, затем - 10^-10, 10^-9, 10^-8, 10^-7

6. Засеять на 5 пробирок с 9 мл среды Сидоренко по 1,0 мл взвеси фекалий в

разведениях 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4, 10^-5

7. Засеять шпателем по 0,1 мл фекалий в разведении 10^-7, на каждую из 8 сред в

чашке Петри: МПА, Эндо, кровяной агар, ЖСА, ВСА, Плоскирева, Эндо с 3%

крови

8. Засеять на среду Сабуро 0,1 мл фекалий в разведении 10^-2

9. Разместить посевы в термостате (в чашках с МПА, Эндо, Эндо с кровью, КА,

ЖСА, ВСА, Сабуро, Плоскирева), в анаэростате (в пробирках со средами

Сидоренко, Блаурок и в чашке со средой Рогозы) и выращивать при 37^оС в

течение суток (на Блаурок - 5-6 дней, на Сабуро - 3-5 дней).

10.Записать название реферата по дисбактериозу для составления текста дома

Контроль качества работы студента по:

1. Правильности выполнения правил техники безопасности проведения работ в микробиологической лаборатории

2. Правильности, аккуратности работы с пипеткой и грушей при изготовлении разведений фекалий и посеве их на питательные среды

3. Аккуратности и точности процедур, связанных с количественными посевами исследуемого материала

Вопросы заключительного контроля знаний студентов:

1. Дать определение, что такое дисбактериоз

2. Назвать нормативы содержания аэробов и анаэробов в фекалиях

3. Материальное обеспечение микробиологической диагностики дисбактериоза кишечника

4. Схема исследования фекалий на дисбактериоз

5. Правила взятия фекалий больного с дисбактериозом и подготовка материала к посеву на специальные и дифференциально-диагностические среды.

Литература:

1. Котова А.Л., Дмитровская Т.И. с соавт. // Бактериологическая диагностика, клиника и основные принципы лечения дисбактериоза кишечника при сальмонеллезах (Методические рекомендации).- Алма-Ата. - 1978. - 31 с.

2. Котова А.Л., Белозеров Е.С. // Сальмонеллезы. - Алма-Ата. Гылым. - 1992. - 216 с.

3. Блохина И.Н., Дорофейчук ВГ //Дисбактериозы. - Л. - Медицина. - 1979. - 174 с.

4. Воробьев А.А., Пак С.Г. с соавт. // Дисбактериозы у детей. (Учебное пособие для врачей и студентов).- М.- 1998.- 64 с.

5. Красноголовец В.Н. // Дисбактериоз кишечника. - М.М.- 1989. - 207 с.

6. Петровская В.Т., Марко О.П. // Микрофлора человека в норме и патологии. - М.М. - 1976. - 232 с.

7. Пинегин Б.В., Мальцев В.А., Корищнов В.М. // Дисбактериоз кишечника. - М.М.- 1984. - 132 с.

8. Эпштейн-Литвак Р.В., Вильшанская Ф.Л. // Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника. (Методические рекомендации). - М. - 1977. - 21. с.

Дата добавления: 2014-01-04