Количество учебных часов - 6 часа

ЗАНЯТИЕ 8

ТЕМА "Микробиологические исследования при дисбактериозе

кишечника (2-5 дни исследования). Заключение"

Актуальность темы:

Последние 1,5-2 десятилетия ознаменованы все более частым появлением термина "дисбактериоз" - во всех странах отмечается резкое увеличение удельного веса дисбактериозов у детей и взрослых, что связывают с ухудшением экологической обстановки, неконтролируемым использованием антибиотиков, гормонов, ростом стрессовых ситуаций, снижением качества пищевых продуктов, воды и пр. Вместе с тем, практически не проводится работа с населением по профилактике дисбактериоза; недостаточно проводится обучение студентов-медиков, практических врачей по проблемам клиники, микробиологической диагностики, лечения, профилактики дисбактериозов. К сожалению, дисбактериозы с легкостью берутся лечить любые врачи.

Как известно, дисбактериоз - это патологический процесс, являющийся дополнительным, а подчас ведущим звеном в патогенезе неспецифических заболеваний кишечника, при котором развиваются качественно-количественные сдвиги состава облигатной, факультативной микрофлоры.

Терминов для обозначения феномена дисбактериоза много: дисбактериоз, дисбактерия, дисмикробиоз, дисбиоз, дисбиоценоз, микробный дисбаланс, дисбактериальная реакция.

Цель занятия:

Студент должен знать:

Схему микробиологических исследований на дисбактериоз кишечника; качественные и количественные показатели нормальной микрофлоры кишечника взрослого человека и ребенка; значение для организма основных видов кишечной защитной микрофлоры - лактобактерий, бифидумбактерий, нормальной кишечной палочки. Объяснить значение для диагностики степени дисбактериоза кишечника факультативных микробов, в том числе E.coli лактозонегативных и гемолитических. Значение применяемых для диагностики дисбактериоза кишечника питательных сред, в частности - Блаурок, Сидоренко, Рогозы (или томатного, капустного агара), МПА, Эндо, Плоскирева, кровяного агара, ЖСА, ВСА, Сабуро. Принципы разведения фекалий физ. раствором и посевы специальных разведений на определенные питательные дифференциально диагностические среды.

Студент должен уметь:

Изучить характер роста микробов на следующих питательных средах:

1. Блаурок - Bifidumbacteria

2. Рогозы (томатном, капустном агаре) - Lactobacillus

3. Сидоренко - Clostridium perfringens

4. Эндо - E.coli и прочие бактерии, относящиеся к Enterobacteriaceae

5. Плоскирева - (Shigella, Salmonella)

6. Сабуро - грибы Candida

7. ЖСА - S.aureus

8. ВСА - Salmonella, E.coli

9. КА - гемолитическая и негемолитическая флора

10. МПА - подсчет ОМЧ кишечных микробов.

Подсчитать количество выделенных микробов, используя число выросших

колоний, степень разведения фекалий, посевную дозу фекалий. Сделать заключение о наличии или отсутствии дисбактриоза кишечника у больного и обосновать заключение.

Вопросы для самоподготовки студентов:

По базисным знаниям:

1. Что такое дисбактериоз? Дать определение.

2. Что такое нормоценоз (эубиоз)?

3. Материальное обеспечение микробиологической диагностики дисбактериоза кишечника

4. Схема исследований фекалий на дисбактериоз

5. Правила взятия материала от больного и обследования на дисбактериоз

По теме занятия:

1. Нормальное содержание E.coli

2. Нормальное содержание Lactobacillus

3. Нормативы содержания Bifidumbacteria

4. Нормативы содержания Enterococcus, Bacteroides

5. Лактозонегативные, гемолитические биоварианты E. coli, их роль в диагностике и определении степени дисбактериоза

6. Грибы Candida, роль в диагностике и определении степени дисбактериоза

7. Порядок подсчета и формула расчета количественного содержания E.coli (и ее биовариантов), Enterococcus, Lactobacillus, Bifidumbacteria, Clostridium perfringens

8. Пределы допустимого содержания УПМ - Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Proteus, Ps.aeruginosa, Candida

9. Заключение бактериолога при выявлении в фекалиях от больного с дисбактериозом Salmonella, Shigella, Yersinia

10. Составление заключения с определением степени дисбактериоза кишечника

Аннотация:

Как видно из занятия №7, микробиологическое исследование фекалий на дисбактериоз кишечника - сложный, длительный, дорогой, трудоемкий анализ (см. схему микробиологической диагностики дисбактериоза кишечника). Материальное обеспечение (см. занятие №7) включает большое число различных питательных сред, специальной лабораторной посуды (чашки, пробирки, флаконы, пипетки, ступки) и аппаратуру.

Для выполнения микробиологических исследований, лаборант-бактериолог доложен обладать отличной техникой количественных посевов, а врач-бактериолог должен хорошо знать все свойства микроорганизмов, составляющих облигатную, факультативную и случайную микрофлору кишечника.

Первый день исследования на дисбактериоз подробно описан в занятии №7.

Второй день исследования включает следующие действия:

1. Через сутки роста извлекают из термостата все среды с посевами (кроме Блаурок,Сабуро) и изучают характер выросших на них колоний. При этом учитывают:

- на МПА - подсчитывают число всех выросших колоний

- На среде Эндо считают число колоний темно-вишневого цвета с металлическим блеском (E.coli - нормальные) и число крупных серовато-белых, влажных, блестящих, непрозрачных колоний (E.coli - лактозонегативные); возможно появление мелких, прозрачных, бесцветных колоний (Shigella, Salmonella) - их учитывают особо!

- На среде Эндо с кровью просчитывают число темно-вишневых с металлическим блеском колоний, вокруг которых обозначена зона гемолиза (E.coli - гемолитические).

- На желточно-солевом агаре (ЖСА), выявляют и подсчитывают колонии, вокруг которых образуется "радужный венчик" - зона лецитиназной активности (S.аureus). Следует учитывать, что чаще всего золотистый стафилококк образует эту зону через 48-72 часа роста.

- На висмут-сульфит агаре (ВСА) обычно учитывают достаточно крупные черные, с металлическим блеском колонии, окруженные зоной почернения ВСА - это Salmonella, E coli на этой среде образуют плоские влажные бежево-коричневые колонии; нередко рост сальмонелл на ВСА появляется не через 24 часа, а через 48 часов.

- На среде Плоскирева обычно учитывают мелкие, прозрачные, бесцветные колонии, которые образуют Shigella, E.coli на этой среде образуют плоские, средних размеров непрозрачные красно-желтые колонии.

- На среде Сабуро (на 3-4 день) вырастают крупные, непрозрачные, выпуклые, матовые колонии с кисломолочным запахом - это грибы Candida; на этой же среде через сутки можно просчитать колонии Enterococcus - мелкие, выпуклые, бесцветные, прозрачные.

- На кровяном агаре дают рост различные виды микроорганизмов (мы уже описали их характер роста на дифференциальных средах). Определенные виды микробов на этой среде отличить друг от друга практически невозможно, поэтому на КА обычно просчитывается число гемолитических и негемолитических колоний и при определении степени дисбактериоза можно учесть процент наличия гемолитической (патогенной) микрофлоры в кишечнике больного.

- На среде Рогозы уже через 24 часа (но лучше через 48 часов) учитывается рост Lactobacillus в секторе с посевом наибольшего разведения фекалий. Колонии Lactobacillus - средних размеров или мелкие, белые, непрозрачные, матовые, выпуклые, издающие кисломолочный запах.

- На среде Сидоренко через 24 часа учитывается рост Cl.perfringens, в виде почернения среды. Через 48-72 часа роста выпадает на дно в виде черного осадка. Учитывают пробирку с посевом наибольшего разведения фекалий.

Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Ps.aeruginosa - не притязательны к средам,

растут на МПА, среде Эндо, КА - поэтому число их колоний (по характеру роста, особенно наличию чаще всего сине-зеленого пигмента, сладковатого запаха, по микроскопии подозрительных колоний, если есть необходимость - по ферментативной активности на пестром ряду) регистрируется на какой-то из выше названных сред.

Третий, четвертый, пятый день исследования состоит из наблюдения за появлением роста не выросших на 1-2 день микробов - это бифидумбактерии, рост которых регистрируется обычно на 5день, лактобактерии и грибы кандида, лучше регистрировать на 3-4 день.

Рост Bifidumbacteria регистрируют на 5 день роста в условиях анаэростата на полужидкой среде Блаурок. Они растут в виде длинных (во всю длину столбика со средой) белых, густых тяжей - "сталактитовый" рост. Для количественной характеристики содержания бифидумбактерий в кишечнике учитывают количество роста в пробирке с посевом наибольшего разведения фекалий.

Для определения степени нарушения нормофлоры кишечника, т.е. степени развития дисбактериоза, после учета (как указано выше) характера роста определенных видов микробов и подсчета выросших колоний, расчитывается содержание каждого вида микроба на 1 г фекалий (КОЕ/г).

Пример:

Больной И-в А.С., 35 лет жалуется в течение месяца на неясные боли в животе, плохой аппетит, отрыжку, вздутие живота, жидкий стул. При обращении к врачу был поставлен диагноз: "Дисбактериоз"? и рекомендовано исследование фекалий на дисбактериоз. Врач-бактериолог сделал заключение о наличии у больного дисбактериоза ll степени (см. "Результат анализа").

Дата добавления: 2014-01-04