Гель-фильтрация

Ионообменная хромотография

Адсорбционно-хроматографические методы

Эти методы широко внедряются в производство ферментов, гормонов, рекомбинантных ДНК; для получения БАВ растительного и животного происхождения, к чистоте которых предъявляют особенно жесткие требования, традиционная технология очистки не подходит. В промышленном производстве успешно себя зарекомендовала распределительная хроматография, самый надежный и эффективный метод очистки. В настоящее время широко используют непрерывную колоночную и ступенчатую хроматографию. В табл. 8.1. приведены несколько известных хроматографических методов, основанных на различных параметрах разделяемых молекул.

Таблица 8.1.

Виды хроматографии	Используемые свойства молекул
Ионообменная Гель-фильтрация Гидрофобная Аффинная	Заряд Размер Полярность Структура

Хроматография БАВ с помощью ионообменных сорбентов, называемая ионообменной, является одним из методов разделения, имеющих наибольшую продолжительную историю развития. В настоящее время промышленная ионообменная хроматография стала одной из важнейших технологических стадий получения коммерчески значимых количеств БАВ.

В основе ионообменной хроматографии лежит реакция обмена между неподвижным твердым ионообменным сорбентом и растворенным в растворителе веществом.

Гель-фильтрация, или хроматография на молекулярных ситах, позволяет разделять вещества с различными молекулярными массами. В этом случае насадка колонки состоит из частиц геля с определенным диаметром пор. Если размер молекул больше диаметра пор, то они не могут диффундировать в гель и быстро проходят через колонку, тогда как молекулы меньшего размера проникают в гель и поэтому движутся более медленно (рис. 8.2).

Рис. 8.2. В хроматографии на молекулярных ситах молекулы большего размера быстрее проходят

через колонку, а молекулы меньшего размера задерживаются, проникая в частицы геля

В качестве сорбентов обычно используют сефадексы G₂₅, G₅₀, G₇₅, G₁₀₀, состоящие из полимерных цепей полисахарида декстрана, соединенные через определенные промежутки поперечными связями и образующие своеобразные молекулярные сита. В химико-фармацевтической промышленности более широкое применение находят сефадексы G₂₅ и G₅₀ в виде гранул с диаметром пор 100- 30 мкм и 20-80 мкм соответственно. Проницаемость мембраны для каждого из веществ смеси определяется величиной молекулы. В этой связи гель-хроматографию иногда называют молекулярным просеиванием. Определенный объем растворителя вымывает из колонки вещества с большей молекулярной массой (сефадексы G₂₅), и с меньшей молекулярной массой (G₂₅, G₅₀).

Основной величиной, измеряемой в гель-хроматографии, является удерживаемый объем V_e:

V_e = V₀ + K_d • V_p,

где V₀ и V_p - объемы подвижной и неподвижной хроматографических фаз;

K_d – коэффициент распределения, который зависит от соотношения размеров молекул и пор.

Гель-фильтрация – метод, малочувствительный к составу образца, используются в основном при удалении осадителя, замене буфера и обессоливании.

Дата добавления: 2014-01-04