Микробные пейзажи при нитрификации, разложении гумусовых кислот и деструкции симазина и атразина (метод Теппер)

Изучение микробных ценозов, участвующих в разложении гербицидов — производных сим-триазинов в почве

Материалы и оборудование

Гелевые пластины, пропитанные минеральной средой Виноградского (в чашках Петри), овсяная солома, почва, стерильные колбы 99 мл водопроводной воды, cперильные пипетки Мора на 1 мл, микроскопы и все необходимое дли микроскопирования.

Вводные пояснения. Гербициды триазины (атразин и симазин) широко применяют при выращивании кукурузы, сорго, проса, плодов и овощей. Остатки их могут довольно долго (до 18 мес.) сохраняться в почве и причинять сущест­венный вред последующим культурам. В связи с этим необхо­димо иметь представление о микроорганизмах, участвующих в деструкции триазинов в почве, тем более что есть данные об их причастности к трансформации гумуса.

Постановка опыта. Для выявления наиболее конкурен­тоспособных микроорганизмов, ассимилирующих триазины, можно поставить лабораторный опыт на гелевых пластинах (см. 7.2.1).

Отмытые от следов хлора и прокипяченные гелевые пластины пропитывают 3 мл минеральной среды Виноградского с добавлением 5 г СаСО₃ на 200 мл дистиллированной воды. В каждую чашку вносят 1 мл раствора симазина или атразина из расчета 2, 5, 10 мг д. в. (действующего вещества) и 1 мл почвенной суспензии в разведении 10^-2. Растворы тщательно перемешивают, подсушивают при 40—45 °С до образования глянцевой (или эмалевой) поверхности. Для инкубации чашки помешают крышками вниз во влажную камеру и выдерживают в термостате при 25—28°С.

Анализ. Опыт снимается после 6 мес. инкубации. Пе­ред определением остаточного количества симазина или атра­зина чашки просматривают под микроскопом при увеличени­ях (окуляр 10х, объектив 3х; окуляр 10х, объектив 8х) и описывают культуральные признаки колоний.

После микроскопирования препаратов из колоний сус­пензию последних высевают поверхностно на нитритном ага­ре. При инфицировании среды в чашках с триазинами суспен­зией дерново-подзолистой почвы развиваются бактерии, участвующие в процессе минерализации гумусовых кислот (Nocardia. Arthrobacter и представители Micromonospora), в неко­торых случаях — и бактерии рода Bactoderma.

В опытах на гелевых пластинах развивается аэробная микро­флора, которой, как известно, присуща гидрофобность. Поэто­му, если в чашку, в которой прошел тот или иной процесс, до­бавить осторожно с одного края 6—8 мл дистиллированной во­ды, бактерии с поверхности гелевых пластин поднимутся к поверхности воды (см. 8.2.1). Прикоснувшись к ней чистым обезжиренным предметным стеклом, получают отпечаток (реп­лику) микроорганизмов, развившихся на гелевых пластинах. Исключение составляет мицелий актиномицетов и микромоноспор, вросший в гель. После фиксации и окраски препараты просматривают с использованием иммерсионной системы. На них, как правило, хорошо видны микробные пейзажи.

В опытах по изучению 1-й фазы нитрификации при ин­фицировании среды дерново-подзолистой почвой через 21 — 25 сут обнаруживаются бактерии рода Nitrosomonas, а при ин­фицировании среды суспензией торфяно-болотной почвы ни­зинного типа — иногда и Nitrosococcus (рис. 29, а).

	Рисунок 29 - Микробные пейзажи в репликах из опытов на гелевых пластинах: а — Nitrosomonas, б — фрагментированные гифы Nocardia; в — бактерии рола Bactoderma

В опытах по разложению микроорганизмами гумусовых кислот (4—5 мес. инкубации и более) можно обнаружить: пред­ставителей автохтонной группы — септированные гифы, палоч­ковидные и кокковидные фрагменты Nocardia (рис. 29, б); не­спороносные палочки; расположенные в один слой и соединен­ные в пленку бактерии рода Bactoderma (рис. 29, в); иногда и более поздние периоды в виде спутников — бактерии рода Nitrosomonas.

В опытах по разложению триазинов (симазина и атрази­на) кроме фрагментированных гифов Nocardia встречаются бактерии рода Bactoderma, скопления палочек и кокков пред­ставителей рола Arthrobacter, иногда (при более высоких дозах гербицида) развивается мицелий с одиночными спорами видов рода Micromonospora.

Дата добавления: 2014-01-04