Определение бактерий группы Proteus по методу Шукевича

Определение бактерий р. Salmonella в рыбе и рыбной продукции

Микроорганизмов.

В стерильные чашки Петри вносят по 15 мл расплавленного РПА и дают застыть. Пластинки подсушивают 30 минут при температуре 50⁰С. Анализируемую пробу разводят как указано выше. Далее с помощью стерильной градуированной пипетки по 0,01 мл каждого разведения переносят в чашки Петри. Жидкость на поверхности агаровых пластинок растирают стеклянным шпателем и оставляют пластинку на 15 минут, чтобы жидкость всосалась (для каждой пластинки используют стерильный шпатель).

Чашки Петри подписывают и помещают в термостат пластинкой вверх. Посевы термостатируют при температуре 30⁰С в течение 3-х суток. Количество клеток в грамме рыбы определяют, учитывая разведение, объем посеянной жидкости и массу навески.

Среднюю навеску рыбы массой 25 г отбирают в стерильную емкость, измельчают и помещают в среду обогащения Мюллера или селенитовый бульон. Соотношение навески и среды должно быть 1:5. Посевы термостатируют 18-20 часов при температуре 37⁰С. Если среда замутится, то из нее петлей производят посев на поверхность элективных питательных сред ВСА, Эндо, Левина или Плоскирева в чашках Петри. Посевы инкубируют на среде ВСА 48 часов, на остальных 18-24 часа при температуре 37⁰С

На ВСА вырастают колонии черного и коричневого цвета с ртутным металлическим блеском, среда под колониями чернеет, на средах Эндо, Плоскирева, Левина колонии прозрачные, бледные или слегка розоватые. Материал из подозрительных изолированных колоний пересевают уколом и штрихом в скошенный столбик питательной среды трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому. Посев инкубируют в течение 12-16 часов при температуре 37⁰С. Стерильная среда имеет розово-малиновый цвет. Отсутствие изменения поверхности скошенного агара указывает на то, что лактоза и сахароза не разлагаются исследуемой культурой. Пожелтение столбика указывает на разложение глюкозы, пузырьки газа свидетельствуют о газообразовании, почернение столбика – об образовании сероводорода. Культуры образующие сероводород, ферментирующие глюкозу и не ферментирующие лактозу, сахарозу и мочевину, подвергают серологическому исследованию. С ними проводят реакции агглютинации с поливалентной салмонеллезной сывороткой. Если реакция оказывается положительной (при смешивании капли сыворотки и культуры появляются муть и хлопья), культура считается подозрительной на Salmonella, ее опечатывают и отправляют на санэпидстанцию для идентификации.

Стерильной пипеткой производят посев 0,1 мл исходной 10% взвеси на свежескошенный РПА, так чтобы жидкость не стекала по скосу. Посев термостатируют при 37⁰С 18-24 часа. Бактерии рода Proteus дают на косом агаре тонкую ползущую вуалеподобную колонию, поднимающуюся по среде и по стеклу. Культура издает неприятный гнилостно-фекальный запах. На среде Эндо с молоком они дают зону протеолиза, т.к. обладают протеолитической активностью. При длительном хранении чашек с посевами колонии мутнеют и приобретают бурую окраску.

На ВСА через 48 часов колонии протея вырастают в виде изолированных колоний грязно-коричневого цвета, окраска среды под ними не изменяется.

Дата добавления: 2015-07-02