Кислотный гидролиз крахмала и идентификация продуктов гидролиза

Лабораторная работа № 4

Цель работы: на примере кислотного гидролиза крахмала изучить процесс последовательной деполимеризации полисахарида. Провести хроматографический анализ гидролизата, идентифицировать продукты гидролиза.

Реактивы и оборудование:

1) крахмальный клейстер;

2) 10%-ный раствор серной кислоты;

3) 0,1 н раствор йода в KI;

4) пластинки «Силуфол» для ТСХ;

5) разделяющая система растворителей;

6) реагент для проявления пластинок;

7) вода дистиллированная;

8) стаканы химические на 50 мл;

9) штатив с калиброванными пробирками на 10 мл;

10) пипетки;

11) стеклянная палочка;

12) хроматографическая камера;

13) термостат;

14) весы лабораторные;

15) мерный цилиндр на 25 мл.

Опыт 4.1 Приготовление крахмального клейстера.

В химическом стакане растворяют 1,5 г крахмала в 25 мл дистиллированной воды и доводят до кипения при интенсивном перемешивании стеклянной палочкой.

Опыт 4.2 Гидролиз крахмала.

При нагревании крахмала с разбавленными кислотами происходит его гидролиз по следующей схеме:

(С₆Н₁₀О₅)_х ® (С₆Н₁₀О₅)_y ® С₁₂Н₂₂О₁₁ ® С₆Н₁₂О₆

крахмал декстрины мальтоза глюкоза

где у < х.

В мерную пробирку помещают 2 мл крахмального клейстера и 6 капель раствора серной кислоты. Содержимое пробирки встряхивают и ставят в стакан на 50 мл с кипящей водой. Каждые 2 минуты отбирают пипеткой каплю раствора и переносят в пробирку с раствором йода. Для этого предварительно в 8 пробирок помещают по одной капле раствора йода и 5 капель воды.

Последовательные пробы обнаруживают постепенное изменение окраски при реакции с йодом (синюю, сине-фиолетовую, красно-фиолетовую, красновато-оранжевую, оранжевую и желтую).

Крахмал с йодом дает синее окрашивание. Декстрины, в зависимости от величины цепочки, с йодом окрашиваются в фиолетовые, красные и оранжевые цвета. Мальтоза и глюкоза не изменяют окраски йода.

Гидролиз крахмала заканчивают, когда крахмальный клейстер не будет давать цветной реакции с йодом. Отмечают общую продолжительность гидролиза.

По окончании гидролиза проводят анализ реакционной среды методом ТСХ.

Опыт 4.3 Метод ТСХ.

На подготовленную пластинку ТСХ «Силуфол» с помощью хроматографического шприца наносят 1 мкл гидролизата в виде сплошной полосы длиной 2-7 мм, отступая от бокового и нижнего краев пластинки на расстояние 10 мм. Пластинку вертикально помещают в камеру, которая заполнена разделяющей смесью до высоты 5 мм. Состав разделяющей смеси: н -бутанол - уксусная кислота - вода (60 мл - 15 мл - 25 мл). Пластинку выдерживают в камере до тех пор, пока высота подъема фронта восходящего растворителя не достигнет отмеченной длины разделительного пути. Разделительный путь (расстояние от линии старта до фронта растворителя) равен 90 мм.

По окончании хроматографического разделения пластинку вынимают из камеры и сушат при комнатной температуре в вытяжном шкафу до полного испарения остатков растворителей.

Затем разделение повторяют в той же системе растворителей. Высушенные пластинки погружают в реагент, представляющий собой смесь: н -бутанол - водоуксусная кислота - фосфорная кислота – анилин - дифениламин (60 мл - 25 мл - 15 мл - 10 мл - 1 мл - 2 г). Пластинки снова сушат и проявляют в термостате при температуре 120⁰С в течение 5 мин.

Идентификацию продуктов гидролиза проводят с помощью свидетелей и по значениям R_f. Данные заносят в таблицу 3.

Таблица 3.

№ п/п	Название компонента смеси	Rf	Цвет пятна
	Декстрины
	Мальтоза
	Глюкоза

Дата добавления: 2017-02-01