Определение гемоглобина

В классическом гемиглобинцианидном методе (метод Драбкина) гнмоглобиин окисляется до Fe³⁺-метгемоглобина феррицианидом, затем метгемоглобин переводится в стабильный цианметгемоглобин цианидом. Оптическая плотность CnmetHb измеряется при длине волны 540 нм, при которой имеется максимум абсорбции. Гемиглобинцианидный метод рекомендован Международным комитетом по стандартизации в гематологии Всемирной организации здравоохранения и используется в мировой практике более 30 лет.

В гематологических анализаторах к методам определения гемоглобина предъявляется ряд специфических требований. Во-первых, время реакции должно быть в десятки раз меньше для обеспечения высокой производительности анализаторов. Во-вторых, для оптимизации конструкции анализаторов гемоглобин должен измеряться в том же гемолизате, который используется для подсчета лейкоцитов, и, следовтельно, компоненты, обеспечивающие гемоглобиновую реакцию, не должны негативно влиять на подсчет лейкоцитов.

Многие гематологические анализаторы измеряют концентрацию гемоглобина модифицированным гемиглобинцианидным методом. Высокая скорость реакции достигается путем быстрого лизиса эритроцитов, денатурирования и окисления гемоглобина до Fe³⁺ с помощью поверхностно-активных веществ. Последующая реакция с цианидом формирует устойчивую форму со пектромпоглощения, похожим на спектр гемиглобинцианида в методе Драбкина с максимумом поглощения около 545 нм. Достоинством метода является его простота, высокая скорость реакции и стабильность конечного продукта. Применение циановых методов в гематологических автоанализаторах имеет два существенных недостатка, связанных с тем, что цианид из флаконов постепенно выпаривается в виде синильной кислоты. Во-первых, это может оказывать вредное воздействие на персонал при плохой вентиляции помещения. Во-вторых, приводит к ухудшению реакции и изменению калибровки по гемоглобину через 2-3 месяца после подсоединения к прибору флакона с гемолитиком.

С учетом недостатков модифицированных гемиглобинцианидных методов в последниегоды в большинстве новых моделей гематологических анализаторов используются бесциановые методы. Одной из первых бесциановый SLS-метод (натрия лаурилсульфат) применила фирма Sysmex. Так как этот метод оказался не совместимым с определением лейкоцитов, для его реализации использовался дополнительный реагент и канал измерения.

В других современных бесциановых гемолитиках применяются компоненты гемихромной реакции, которые совместимы с подсчетом лейкоцитов и их дифференциацией на три популяции. Высокая скорость реакции также достигается путем быстрого лизиса эритроцитов, денатурирования и окисления Fe²⁺ до Fe³⁺ с помощью окислителей в присутствии поверхностно-активных веществ. При этом в качестве лигандов атомов железа гема используются отличные от цианида вещества.

Оптимальной областью фотометрирования является максимум спектральной кривой поглощения. Для гемиглобинцианида это 540 нм, которая и есть рабочая длина волны для этого метода. Измерение в максимуме кривой, где смягчаются требования к точности установки длины волны, снижает требования к точности изготовления и стабильности оптических фильтров. Максимум кривой поглощения гемихрома находится на длине волны 533 нм. Однако измерение на этой длине волны возможно только в спектрофотометрах. В фотометрических ячейках гематологических анализаторов, как правило, применяются полосовые светофильтры с типовыми длинами волн. Ближайшая к 533 нм типовая длина волны 540 нм, на ней и проводится фотометрирование с учетом коэффициента пересчета для 540 нм. При переходе с цианового на бесциановый метод, как правило, требуется корректировка калибровки гемоглобина в пределах 0-5%.

Теперь более подробнло остановимся на каждом показателе встречающемся в общем анализе крови.

Дата добавления: 2014-11-16