Тема 2. Приготовление препаратов микроорганизмов

ПРИЖИЗНЕННОЕ ИЗУЧЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ (1 ч)

Работа 4. Приготовление препарата методом раздавленной капли

На чистое предметное стекло наносят ровную каплю водопроводной воды и помещают в нее немного исследуемых микроорганизмов. Рекомендуются настои естественных материалов (мяса, рыбы, муки, овощей, навоза и др.). Покровное стекло ставят на ребро у самого края капли и постепенно опускают на нее, предотвращая появление пузырьков воздуха. Излишек жидкости удаляют фильтровальной бумагой.

При исследовании жидкой культуры неразбавленную суспензию клеток наносят на стекло пипеткой.

Микроскопируют препарат сухой системой. Препарат позволяет установить форму клеток, их размеры, расположение, наличие подвижности.

Работа 5. Приготовление препарата методом висячей капли

В центр покровного стекла наносят бактериологической петлей небольшую ровную каплю исследуемой жидкости (рис. 3). На покровное стекло с каплей осторожно накладывают предметное стекло с лункой так, чтобы капля помещалась в центре углубления.

Края лунки предварительно смазываются вазелином, препарат быстро переворачивают и микроскопируют.

Метод используется в основном для выявления подвижности микроорганизмов.

Наблюдают висячую каплю при суженной диафрагме с плоским зеркалом. Препарат «висячая капля» может храниться долго.

Рис. 3. Приготовление препарата методом висячей капли

Работа 6. Прижизненная окраска микроорганизмов

К капле микробной суспензии на предметном стекле добавляют каплю красителя и накрывают все это покровным стеклом.

Рекомендуется дифференцировать пекарские дрожжи для выявления живых и мертвых клеток. Мертвые клетки окрашиваются быстрее и ярче.

Для прижизненной окраски используются малые концентрации нетоксичных красителей: нейтральный красный, нейтральный фиолетовый, метиленовый синий, эозин, эритрозин в концентрациях 1:10 000,1:100 000.

Отработанные препараты живых микроорганизмов помещают в дезинфицирующий раствор.

Работа 7. Приготовление фиксированного и окрашенного

(постоянного) препарата

В постоянных препаратах микроорганизмы зафиксированы, т.е. убиты и приклеены к стеклу, затем окрашены.

Метод включает несколько этапов:

1. Обезжиривание стекол. Наиболее надежна обработка смесью Никифорова (эфир + спирт 1:1). В повседневной работе бывает достаточно натереть стекло мылом и вытереть салфеткой или обжечь стекло в пламени горелки.

2. Приготовление мазка. На стекло наносят суспензию клеток в капле водопроводной воды и с помощью иглы или покровного стекла распределяют ровным слоем (≈ 4 см²).

3. Высушивание мазка производится на воздухе или очень высоко над пламенем горелки (чтобы избежать коагуляции).

4. Фиксация обеспечивает гибель клеток, прилипание к поверхности стекла и большую восприимчивость к красителю. Простейший способ – фиксация пламенем: препарат проводят 2-3 раза в пламени горелки. В особых случаях применяют химические фиксаторы: осмиевая кислота, спирт, формалин и другие.

5. Окраска. На охлажденный препарат наносится краситель на 1-3 минуты, затем препарат тщательно промывается водой.

6. Высушивание производится на воздухе. Можно с помощью фильтровальной бумаги.

7. Микроскопирование производится без покровного стекла в иммерсионной системе.

Тема 3. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, ИХ ПРИГОТОВЛЕНИЕ,

РАЗЛИВКА. ПОЛУЧЕНИЕ ЭЛЕКТИВНЫХ КУЛЬТУР (1 ч)

Работа 8. Получение элективной культуры сенной палочки

(Bacillus subtilis)

Элективными (накопительными) называют культуры, в которых преобладают особи одного вида микроорганизмов, но наряду с ними присутствуют и другие.

Оборудование: ножницы, сено, стерильные конические колбы, вата, мел, электрическая плитка, воронка.

Ход работы

Колбу объемом 500 мл на четверть заполняют мелко нарезанным сеном, доливают водой, добавляют щепотку мела и кипятят 15-20 минут. Отвар фильтруют через вату, вложенную в воронку, в стерильные конические колбы слоем 1-2 см, закрывают ватными пробками. Температура инкубации – 22-25ºС.

Через сутки обнаруживаются подвижные формы Bacillus subtilis (рис. 4а).

В двух-трехсуточной культуре наблюдается пленка из палочек, соединенных в нити (рис. 4б).

В шести-семидневной культуре наблюдается образование спор (рис 4в).

Задание: пронаблюдать и зарисовать цикл развития Bacillus subtilis:

Рис. 4:

а - однодневная культура; б - двухдневная; в - семидневная

Работа 9. Разлив агара

Оборудование: пробирки со стерильным мясо-пептонным или сухим питательным агаром (МПА, СПА), водяная баня, спиртовка, спички, стерильные чашки Петри.

Ход работы

1. Разогреть пробирки с агаром на водяной бане до расплавления.

2. Завернутую в бумагу чашку положить перед собой, бумагу развернуть, за чашкой поместить зажженную спиртовку.

3. Обжечь пробку и горлышко пробирки с МПА, держа ее в правой руке.

4. Левой рукой вынуть ватную пробку, приоткрыть чашку Петри, ввести в нее горлышко пробирки и влить агар.

5. Закрыть чашку и, покачивая ее, распределить агар ровным слоем. Дать застыть.

Тема 4. ЭКОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ.

Дата добавления: 2014-12-17