Тема 9. Трансформация микроорганизмами

Изучение культуры

Изучение культуры

1. Изготовить препарат «раздавленная капля».

2. Окрасить раствором Люголя.

3. Промикроскопировать, пользуясь объективом х 40. Фиолетовое окрашивание бактериальных клеток подтверждает наличие гранулезы.

4. Изготовить фиксированный окрашенный препарат.

5. Изучить, пользуясь иммерсионной системой.

6. Выполнить рисунок.

При изучении преимущественно выявляются спорообразующие бактерии Clostridium pasteurianum.

Работа 31. Уксуснокислое брожение

Оборудование: пиво, настой чайного гриба, конические колбы, вата, предметные стекла, фуксин, микроскоп с иммерсией, спиртовки, петли.

Ход работы

Закладка элективной культуры

1. В колбы налить тонкий (0,5 см) слой пива.

2. Закрыть рыхлыми ватными пробками.

3. Инкубировать при t = 30ºС в течение 5-7 суток.

1. Изготовить фиксированные окрашенные препараты пленки, образовавшейся на пиве, а также препарат настоя и кусочков чайного гриба.

2. Изучить под микроскопом с иммерсией. Выполнить рисунки.

3. Описать характер образовавшихся на пиве пленок.

При микроскопировании выявляются дрожжи Mycoderma vini и бактерии Acetobacter aceti, Acetobacter pasteurianum, Acetobacter xylinum.

Рис. 18. Уксуснокислые

бактерии

СОЕДИНЕНИЙ СЕРЫ (2 ч)

Работа 32. Серобактерии

Оборудование: цилиндр на 200 мл, конические колбы на 100-150 мл, большие пробирки, гипс, сваренное вкрутую куриное яйцо, почва, ил, сточная вода, остатки водных растений, предметные и покровные стекла, красители, компоненты для элективных питательных сред, ил из серного источника, микроскопы с иммерсией, спиртовки, петли, пинцеты, соль Мора ((NH₄)₂SO₄·FeSO₄·6H₂O), железный купорос (FeSO₄·7H₂O), парафин.

Ход работы

Закладка культур бесцветных собственно серобактерий

1. Высокий цилиндр заполнить доверху водой.

2. На дно опустить яйцо, немного гипса, остатки водных растений.

3. Заразить илом и сточной водой, закрыть марлей.

4. Инкубировать 1-1,5 месяца при комнатной температуре.

На поверхности среды развивается пленка из нитей серобактерий (например, p. Beggiatoa). В клетках видны отложения капельножидкой серы.

Рис. 19. Бесцветные бактерии, окисляющие сероводород.

А. Beggiatoa gigantean с включениями серы. Б. Розетки Thiothrix. В. Achromatium oxaliferum с включениями карбоната кальция и серы. Г. Thiovulum с включениями серы

Закладка элективной культуры тионовых серобактерий

1. Приготовить питательную среду: водопроводная вода – 100 мл, Na₂S₂O₃ – 0,5 г, NaHCO₃ – 0,1 г, K₂HPO₄ – 0,02 г, NH₄Cl – 0,01 г, MgCl₂ – 0,01 г.

2. Разлить по 30-50 мл в колбы. Заразить илом и сточной водой.

3. Инкубировать при t = 30ºС в течение 7-10 суток.

В среде может накапливаться свободная сера, а из среды выделяются чаще бактерии p. Thiobacillus.

Закладка элективной культуры десульфатирующих бактерий

1. Приготовить элективную среду: дистиллированная вода – 100 мл, натрий (или кальций) молочнокислый (CH₃-CH(OH)-COONa) – 0,35 г, (NH₄)₂SO₄ – 0,4 г, K₂HPO₄ – 0,05 г, Mg SO₄ – 0,1 г, CaSO₄ – 0,05 г, соль Мора – 0,05 г. рН среды = 7.

2. Среду стерилизовать в автоклаве при 0,5 атм. 30 минут. Соль Мора стерилизуют отдельно и добавляют в среду перед посевом.

3. Разлить в стерильные большие пробирки доверху.

4. Заразить почвой (0,2 г) или сточной водой (0,5 мл).

5. Для обнаружения сероводорода внести кристаллик железного купороса.

6. Закрыть резиновыми пробками, заплавить парафином (анаэробные условия).

7. Инкубировать 2-3 недели при t = 25-30ºС.

Из осадка среды выделяется накопительная культура Desulfovibrio desulfuricans (рис. 20).

8. Выполнить рисунок, проследить выделение сероводорода по запаху и почернению среды при образовании сульфида железа.

Рис. 20. Десульфатирующие серобактерии Desulfovibrio desulfuricans

Дата добавления: 2014-12-17