Препаратов

Определение бактерицидных свойств растворов дезинфицирующих

Порядок выполнения работы

Определение эффективности действия дезинфицирующих препаратов.

Эффективность действия антисептика характеризуется фенольным коэффициентом. Фенольный коэффициент это отношение наибольшего разведения исследуемого вещества не вызывающего гибели стандартной разводки бактерий за 5 минут, но убивающего их за 10 минут, к соответствующему разведению фенола.

В качестве стандартных культур используют E. coli, Ps. aeruginosa, St. aureus, Str. fecalis, Bac. subtilis, Mycobacterium phlei, Oidium lactis (Oospora lactis).

Приготовление суспензии микробов

Первые пять культур выращивают на косом РПА или МПА 24 часа при37⁰С с тремя последующими пересевами и выращивании при том же режиме.

Mycobacterium phlei выращивают на МПА + 2% глюкозы, режим выращивания как указано выше.

Bac. subtilis после третьего пересева термостатируют еще 24 часа при 50⁰С, чтобы гарантировать достаточное спорообразование.

Oospora lactis культивируют при30⁰С 48 часов с тремя последующими пересевами.

Для приготовления суспензии микробов выросшую культуру из пробирок с косым агаром смывают 3-4 мл стерильного физиологического раствора. При этом смыв надо брать со всех семи культур по 4-5 штаммов каждого вида. Для достижения гомогенности клеточного материала смыв нескольких штаммов одной и той же культуры необходимо смешивать и профильтровывать под вакуумом через стерильный стеклянный фильтр ПС-3, ДГ-29. Смыв Oospora lactis перед фильтрацией сильно встряхивают в пробирке со стерильными бусами для раздробления мицелия, затем фильтруют.

Уровень разбавления суспензии физиологическим раствором устанавливают с помощью фотоэлектрического колориметра ФЭК-м до 20%-ной адсорбции при красном светофильтре №4 и пользуются черными делениями барабана. Для этого необходимо брать кюветы, где расстояние между рабочими гранями равно 30 мм. Перед приготовлением суспензии микробов из каждой культуры, выращенной на косом агаре, готовят окрашенный по Граму препарат и просматривают под микроскопом для определения чистоты культуры.

В пробирки разливают по 10 мл. растворов дезинфицирующих веществ разной концентрации и нагревают на водяной бане до 20, 40-45 и 50-55⁰С. После достижения нужной температуры в каждую пробирку вносят по 0,1 мл суспензии микробов, закрывают стерильными резиновыми пробками и хорошо перемешивают. Через определенный промежуток времени (2,5 мин, 5, 10 и 15 мин.) по 0,5 мл полученной смеси высеивают на жидкие аналоги первичных сред (РПБ или МПБ, МПБ + 2% глюкозы и жидкое сусло).

Если исследуемое вещество содержит Cl, перед посевом 0,5 мл смеси смешивают с 10 мл стерильного раствора гипосульфита для нейтрализации остаточного действия Cl и только по истечении 5-ти минут пересевают в 10 мл питательной среды. Посевы термостатируют при температуре предварительного культивирования, предварительный результат оценивают через 48 часов, окончательный результат учитывают через 6-8 суток.

Если в первом, ориентировочном опыте не наблюдается роста микробов, то концентрации уменьшают, опыт повторяют, если же выбранные концентрации не оказывают губительного действия, то концентрацию испытываемого соединения увеличивают.

Бактерицидная концентрация считается установленной при получении трех одинаковых данных в повторных опытах.

Дата добавления: 2015-07-02