Метод мембранных фильтров

Бродильный метод с использованием ТТХ

Ускоренный метод исследования кишечной палочки в почве

Определение титра кишечной палочки почвы

Титр кишечной палочки почвы – это наименьшая масса почвы, выраженная в граммах, в которой обнаружена одна кишечная палочка. Коли–индекс почвы – количество кишечных палочек в 1 г почвы. При санитарной оценке почвы учитывают все разновидности кишечной палочки, вызывающие газообразование на жидких средах с глюкозой при 43-45⁰ С.

Для определения кишечной палочки применяют трехэтапный бродильный метод. Питательные среды, употребляемые при аналогичном исследовании воды, в данном случае малопригодны, т.к. разнообразные микроорганизмы почвы, развиваясь на этих средах, могут подавить рост кишечной палочки или вызвать газообразование независимо от ее присутствия. Поэтому для засева почвы применяют среды, содержащие генцианвиолет или другие антисептические вещества, подавляющие развитие Грампозитивных бактерий, но не препятствующие росту кишечной палочки. Наиболее пригодна для этих целей среда Кесслера - Свенартона, содержащая генцианвиолет. При анализе чистых почв в бродильные сосуды засевают 1,0, 0,1, 0,01, 0,001 г, загрязненных – 0,001,0,0001, 0,00001, 0,…..1 г. Использование пипеток такое же как и при определении микробного числа почвы. Посевы инкубируют при 43⁰ С 48 часов.

Для выявления кишечной палочка в почве можно использовать среду с ТТХ (2-, 3-, 5-трифенил-тетразолий-хлорид). Эта среда по чувствительности не уступает среде Кесслера-Свенартона и на сутки сокращает срок исследования первой бродильной пробы.

Метод основан на способности бактерий группы кишечной палочки восстанавливать бесцветный ТТХ в устойчивое соединение трифенилформазин. Он плохо растворим в воде и выпадает в виде красно-коричневого осадка. Кишечная палочка довольно устойчива к действию формазина, в тоже время формазин тормозит развитие сопутствующей микрофлоры. Анализ выполняется по схеме трехэтапного бродильного метода. Инкубирование первой бродильной пробы проводится не 48 часов, а только 24.

Подготовка почвенной суспензии, фильтрация через мембранные фильтры № 3, перенос фильтров на среду Эндо ничем не отличаются от таковых при исследовании воды.

Определение коли-титра в 0,1 г почвы и более связано с некоторыми трудностями, т.к. на фильтре откладывается большое количество взвешенных частиц, затрудняющих рост кишечной палочки. В связи с этим рекомендуется на мембранный фильтр №3 накладывать стерильный планктонный фильтр и фильтровать требуемую взвесь почвы через оба фильтра, затем оба фильтра переносят на среду Эндо и проращивают при температуре 43-45⁰ С. Дальнейший ход анализа и оценка его результатов проводятся также, как и при анализе воды.

Дата добавления: 2015-07-02