Исследование почвы на наличие Cl. botulinum

Исследование почвы на наличие Cl. tetani (возбудитель столбняка)

Определение термофильных бактерий

Определение E. coli методом прямого посева.

Обнаружение в почве протеев

Готовят разведение основной почвенной суспензии до1:10⁴_. Из каждого разведения по 0,1 мл вносят в конденсационную воду свежескошенного РПА не загрязняя поверхность свежескошенного МПА или РПА (по методике Шушкевича). Пробирки термостатируют 24-48 часов при 37⁰ С. Proteus vulgaris образует на скошенной поверхности тонкую вуалеподобную колонию, которая может подниматься на стенки пробирки, культура издает фекальный запах. В мазке из колонии обнаруживаются мелкие бесспоровые палочки в молодой культуре, в старых культурах появляются нитевидные, слегка изогнутые клетки. Бактерии очень подвижны, образуют H₂S, индол, разжижают желатин, расщепляют мочевину, сбраживают с образованием кислоты и газа глюкозу, сахарозу, мальтозу, лактозу и маннит не сбраживают.

При анализе загрязненных почв, отобранных в местах интенсивного фекального загрязнения, рекомендуется проводить прямой поверхностный посев почвенной суспензии в объеме 0,1 - 0,5 мл на среду Эндо. Среду Эндо заранее разливают в чашки Петри и подсушивают в стерильном сушильном шкафу, слегка приоткрыв крышки. Посев производят из разведений почвенной суспензии. При работе с загрязненными почвами обычно используют разведение 1:10⁶. Посев выращивают 24 часа при температуре 37⁰С. Выросшие на фильтре колонии, подозрительные на кишечную палочку исследуют по стандартной схеме (оксидазный тест, мазок, рост на средах Гисса с лактозой и сахарозой).

Учет термофильных бактерий производится на МПА или РПА, разлитых в чашки Петри более толстым слоем чем обычно.

Посев делают из разведения почвенной суспензии 1:10, 1:100, 1:1000 причем из каждого разведения рекомендуется засевать 2-3 параллельные чашки. Термофильные бактерии выращивают при температуре 60⁰С (от58 до 63⁰С). Развившиеся колонии учитывают через 24 часа после посева.

Пробу почвы 20-30 г, тщательно измельчают и перемешивают. Навеску почвы 3-5 г разводят в 8-15 мл стерильного физиологического раствора. Полученную взвесь отстаивают при комнатной температуре 3-4 часа, а затем вводят по 1 мл жидкости под кожу задней лапки 2-м белым мышам. Одновременно ставят контрольный опыт на мышах, которым предварительно была введена противостолбнячная сыворотка. Гибель первых животных с характерными признаками и выживание контрольных мышей указывает на наличие Cl. tetani в исследуемом объекте. В дальнейшем анализ проводят по общей методике выделения клостридий.

Две навески почвы по 20 - 30 грамм растирают в стерильных ступках и вносят в колбы с 80 - 100 мл жидкой питательной среды Китта-Тароцци, одну из этих колб прогревают 30 мин при 80⁰С для уничтожения бесспоровых бактерий. Обе колбы с посевами помещают в термостат на 8-14 суток при 37⁰С, после термостатирования из колб производят высев в столбик агара или на чашки Петри с сахарным агаром и в дальнейшем изучают биологические и антигенные свойства полученных культур.

Для обнаружения токсина проводят биологическую пробу: по 0,5 мл исследуемого материала впрыскивают двум мышам под кожу внутримышечно. В качестве контроля двум мышам вводят прогретую жидкость, а еще двум мышам – на прогретую жидкость вместе с антиботулинической поливалентной сывороткой. Если мыши, которым ввели непрогретую жидкость, погибают через 1 - 4 сут., а контрольные мыши остаются живыми, то результаты на присутствие токсина Cl. botulinum считается положительным.

Дата добавления: 2015-07-02