Определение титра Cl. perfringens

Полный санитарно - микробиологический анализ почвы

К выше описанным анализам при выполнении полного анализа почвы добавляются следующие: определение титра Cl. perfringens, Pr. vulgaris, термофильных микроорганизмов, Cl. tetani, Cl. botulinum.

Cl. perfringens представляет собой палочку с закругленными концами, она неподвижна, в организме человека образует капсулу, образует спору, которая больше поперечника палочки, сдвинута к одному из концов. Молодые клетки красятся по Граму положительно, старые – отрицательно. Бактерия медленно расщепляет желатин, восстанавливает нитраты в нитриты, образует Н₂S, не образует индола, образует ацетилметилкарбинол, свертывает молоко. Cl. perfringens сбраживает с образованием кислоты и газа глюкозу, сахарозу, галактозу, мальтозу, глицерин, не сбраживает маннит, дульцит.

Образует токсины некротического и летального действия, гемотоксин, нейротоксин, а также ферменты лецитиназу, гиалуронидазу, фибринолизин, протеиназу, поэтому под действием этой бактерии быстро происходит распад мышечной ткани.

На питательной среде Китта-Тароцци образует равномерное помутнение и много газа, в анаэробных условиях образует дисковидные колонии.

Cl. perfringens возбуждает пищевые отравления, некротический энтерит, выделяется при заболевании газовой гангреной.

Температурный оптимум развития 37⁰ С, рН 6,0-3,0

Для определения титра Cl. perfringens используют два метода – посев в железо-сульфитный агар (среда Вильсон-Блера) и посев в обезжиренное молоко.

I метод. Обнаружение Cl. perfringens на железо-сульфитном агаре основано на способности этого микроба восстанавливать Na₂S₂O₃ до сульфида натрия Na₂S, который, взаимодействуя с хлорным железом, приводит к образованию сульфидного железа FeS, имеющее черный цвет.

Ход исследования.

Готовят почвенную взвесь, можно использовать разведения для определения коли-титра. Пробирки с разведениями переносят на водяную баню и прогревают 15 мин при 80⁰С.

Стерильной пипеткой берут 1 мл соответствующего разведения и переносят в пробирку с расплавленной и охлажденной до 45⁰С средой Вильсон-Блера. Вращением пробирки в руках почвенную суспензию равномерно распределяют в среде. Посевы выращивают 12-18 часов при43⁰С. О росте бактерий судят по появлению черных колоний и иногда разрыве среды в первые 18 часов. В более поздние сроки такую картину могут давать и другие анаэробы. В мазке обнаруживается характерная микрофлора.

II метод. Этот метод основан на способности Cl. perfringens развиваться в молоке и вызывать в нем специфические изменения с образованием губчатого сгустка на поверхности, отделения сыворотки и образования большого количества газа.

Ход исследования.

Подготовленные разведения почвенной суспензии по 1 мл вносят в пробирки с 5 мл молочной среды Тукаева, инкубируют 12-20 часов при температуре 43⁰С, при наличии специфического изменения молока (см. выше), делают мазки и окрашивают по Граму. В положительным случаях обнаруживают Грамположительные крупные, толстые палочки с центрально или субтерминально расположенными спорами.

Для выявления Cl. perfringens можно использовать сульфит-полимиксин-неоми-циновую среду. Термостатирование посева проводится 10-12 часов при температуре 44-45⁰С, при наличии бактерии образуются черные колонии, дальнейшего анализа не требуется.

Можно использовать также среды Китта-Тароцци, Клодницкого, бульон Мартена с ватными поплавками. Для высева используют прогретые и нативные разведения по 1 мл в жидкую или полужидкую среду. Посевы термостатируют 18-20 час при температуре 37⁰С.

Дата добавления: 2015-07-02