Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона

Отношение к температуре

Отношение к кислороду

Определение физиолого-биохимических признаков

Метод серебрения жгутиков по Морозову

Препарат готовится как описано выше. На препарат наливают на 1 мин. реактив №1. Затем его сливают, промывают водой и наливают реактив №2. Подогревают на слабом пламени до появления паров, тщательно промывают водой и 1-2 минуты (при подогревании) обрабатывают препарат реактивом №3 до появления темно-коричневой окраски мазка, мазок тщательно промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсией.

Реактивы для окраски жгутиков

Приготовление протравы: 12 г танина растворяют при нагревании в 48 мл воды, добавляют 30 мл насыщенного раствора купороса FeSO₄ и 6 мл насыщенного раствора фуксина в 96% спирте. Смесь готовят за несколько дней до употребления, хранят в склянке с притертой пробкой в темном месте. Перед употреблением фильтруют.

Краситель: карболовый фуксин Циля и дист. вода в соотношении 1: 1. Готовят перед употреблением и фильтруют.

Реактив №1: 1 мл ледяной уксусной кислоты, 20 мл формалина40%, 100мл дист. воды. Это жидкость Руге.

Реактив №2: протрава – танин (5 г), фенол кристаллический (1 г) и дист. вода – 100 мл.

Реактив №3 (реактив для серебрения): азотнокислое серебро – 5г, раствор аммиака, вода дистиллированная – 100мл. К 3-4 мл 5% раствора азотнокислого серебра по каплям прибавляют раствор аммиака до помутнения и образования осадка, а затем осторожно до растворения осадка. После этого вновь прибавляют раствор серебра до появления легкой опалесценции. Полученный раствор аммиачного серебра разводят дистиллированной водой в 10 раз.

Потребность бактерий в кислороде определяют по характеру их роста в столбике РПА. С этой целью исследуемый материал высевают уколом в расплавленный и охлажденный до 40-45°С РПА. Укол производят по центру до дна пробирки. После инкубации в термостате в течение 48 часов при температуре 37°С возможны три типа роста: рост в верхней части укола (аэробные микробы), рост в нижней части укола (анаэробные микроорганизмы) и равномерный рост по всей длине (факультативные анаэробы).

Оптимальные температуры роста выявляют путем посева культуры штрихом на скошенный РПА с последующим инкубированием при температурах от 0°С до 80°С. В зависимости от наличия и интенсивности роста микроба его относят к мезофилам (рост при температуре 20-48°С), термофилам (50-80°С) или психрофилам (от 5 до 20°С).

Этот тест направлен на определение характера использования бактериями данного углевода (обычно глюкозы) путем окисления, путем сбраживания или не используется совсем. Применяемая среда состоит из пептона, агара, NaCl, K₂HPO₄, какого-либо углевода и индикатора (обычно бромтимоловый синий). Для анализа готовят две пробирки со средой, из которой удален воздух. Обе пробирки засевают исследуемым материалом. Затем одну из них с целью создания в ней анаэробных условий заливают стерильным жидким вазелиновым маслом или парафином (слой примерно 1 см). Обе пробирки термостатируют. Кислотообразование (пожелтение среды) в не залитой парафином пробирке указывает, что углевод используется путем окисления, тогда как этот же процесс в анаэробных условиях означает, что углевод используется путем сбраживания.

Дата добавления: 2015-07-02