Д. Выявление индола и применяемые реактивы

Г. Выявление сероводорода.

В. Обнаружение аммиака.

Б. Протеолиз казеина.

А. Разжижение желатина.

Протеолитические свойства.

Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам

Названные характеристики определяют посевом уколом в полужидкие питательные среды Гисса с углеводами глюкозой, сахарозой, лактозой, мальтозой и маннитом и индикатором (среды могут быть жидкими, со стеклянными поплавками на дне пробирок, заполненными питательной средой). Пробирки термостатируют 2-4 суток (или 7-10 для медленно развивающихся форм). Отмечают визуальные признаки развития микроба и изменение окраски индикатора, а также наличие пузырьков газа. На основании полученных результатов делают вывод о том, какие углеводы ассимилирует данный микроб и с образованием каких продуктов.

Культуру исследуемого микроба высевают уколом в столбик с РПЖ, инкубируют 4 суток при комнатной температуре. Затем отмечают наличие разжижения и его характер: послойный, воронкообразный, пузырчатый.

Исследуемую культуру засевают на среду Эндо с молоком. Бактерии, обладающие протеолитической активностью, после термостатирования вызывают просветление вокруг колоний.

Высевают исследуемую культуру в РПБ и под пробку укрепляют полоску красной лакмусовой бумаги так, чтобы она не касалась среды. Пробку оборачивают полиэтиленом, чтобы затруднить улетучивание аммиака. Посев термостатируют 2 суток при 37°С. При образовании аммиака красный лакмус синеет.

Для обнаружения сероводорода делают посев уколом в среду РПА с 5% пептона и 0,25% уксуснокислого свинца. Посев термостатируют 7-10 суток при 37°С. При наличии сероводорода среда чернеет вдоль укола.

Возможно использование индикаторной бумажки, смоченной раствором уксуснокислого синца и укрепленной под пробкой в пробирке с посевом в столбик РПА. После термостатирования в течение 7-10 суток бумажка темнеет.

а) Методы выявления

Метод Мореля. В питательную среду (РПБ + 0,01% триптофана) сеют исследуемую культуру. Затем в пробирку подвешивают индикаторную бумажку, смоченную щавелевой кислотой, так, чтобы бумага не касалась среды. Инкубируют 24 часа при 37°С. При образовании индола нижняя часть бумаги окрашивается в красный цвет.

Метод Легаль-Вейля. Этот метод наиболее чувствителен. К суточной или двухсуточной бульонной культуре добавляют 5 капель 5%-го раствора нитропруссида натрия, 5 капель 40%-го раствора NaCl и 7 капель концентрированной уксусной кислоты. В присутствии индола появляется сине-зеленое или темно-синее окрашивание.

Метод Сальковского. К 10 мл исследуемого материала добавляют 1 мл 0,2%-го раствора KNO₂ и несколько капель крепкой серной кислоты. При взаимодействии этих соединений с индолом получается красно-фиолетовое окрашивание.

Выявление с парадиметиламидобензальдегидом. К 10 мл исследуемого материала добавляют 5 мл парадиметиламидобензальдегида и 5 мл насыщенного раствора сульфата калия. При наличии индола возникает интенсивное красное окрашивание.

б) Применяемые реактивы.

Реактив Несслера: 20 г KJ растворяют в 50 мл дистиллированной воды и добавляют до насыщения (около 32 г) небольшими порциями AgJ₂; затем приливают 460 мл воды и вносят 134 г КОН. Отстоявшуюся жидкость сливают в темную склянку.

Приготовление парадиметиламидобензальдегида. 4 г парадиметиламидобензальдегида растворяют в 30 мл 96%-го этилового спирта и добавляют 80 мл концентрированной соляной кислоты.

Дата добавления: 2015-07-02