Вопросы для самопроверки. Необходимое оборудование для одного студента

Необходимое оборудование для одного студента

Построение калибровочной кривой

Определение хлортетрациклина в продуктах

Определение хлортетрациклина в продуктах осуществляется методом диффузии в агар (метод агаровых колодцев).

Определение концентрации тетрациклина проводится по методике разработанной Институтом питания АМН СССР и ВНИИМП и состоящей в следующем.

От средней пробы измельченного образца морепродукта отбирают 40 г и помещают в стакан со 120 мл цитратсолянокислого буфера (рН 4,6-4,8). Смесь мяса с буфером измельчают при помощи микроизмельчителя в течение 1-2 мин и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат используют для определения концентрации антибиотика. Для этого в стандартные чашки Петри наливают по 30 мл стерильного РПА (рН 7,2-7,4) и после подсушивания в термостате при 37⁰С в течение 20-30 минут на поверхность застывшего агара наносят 0,1 мл взвеси односуточной культуры Bac. subtilis L. или Bac. cereus F. (концентрация клеток 500кл/мл). Шпателем Дригальского культуру равномерно распределяют по поверхности агара. После распределения культуры стерильным пробочным сверлом диаметром 7,5 мм вырезают «колодцы» до 6-8 на чашку. В каждый колодец стерильной пипеткой капельницей вносят по 0.1 мл фильтрата. Чашки термостатируют 16-18 часов при температуре 28⁰С. После термостатирования замеряют диаметр стерильных зон вокруг колодцев, включая и диаметр колодца. И по их величине с помощью стандартной кривой определяют концентрацию тетрациклина.

В несколько проб морепродукта, каждая массой по 40 г не обработанных антибиотиком вносят различные количества антибиотика: 5; 2,5; 0,25 и 0,12 мкг/г. Пробы тщательно перемешивают и оставляют на сутки при температуре 3-4⁰С для контактирования с антибиотиком, затем каждую пробу экстрагируют цитратсолянокислым буфером. Далее в фильтратах определяют концентрацию антибиотика методом диффузии в агар (методом агаровых колодцев), как описано выше.

Измерив диаметры стерильных зон (зоны задержки роста вокруг колодцев), строят график – концентрации антибиотика – диаметр зоны задержки роста. Этот график служит стандартом для определения концентрации тетрациклина.

Нистатин определяют таким же методом, только при этом используют культуры Saccharomyces cerevisiae АТСС № 976 3 или Candida parapsilosis в дрожжевой среде. Для определения применяют фосфатный буфер с рН 6,7-7,0.

Этим методом удается определить до 0,1 мг/г тетрациклина и 40-60 мг/г нистатина.

2 стерильные чашки Петри, 60 мл стерильного РПА. культура Вас.subtilis или Bac. cereus F, стерильная вода для смыва культуры, стерильные пипетки с градуировкой 0,1 мл, стерильные шпатели Дригальского, стерильный микроизмельчитель или стерильные ступки, стерильный песок и стерильный пестик. Стерильный цитратсолянокислый буфер. Образцы морепродукта, обработанного и необработанного антибиотиком, фильтры бумажные и стеклянные и стерильная колба для фильтрации экстракта, линейка, термостат с температурой 28⁰С, весы.

1. Что такое антибиотики?

2. Какие требования предъявляются к антибиотикам, используемым в пищевой промышленности?

3. Как определить чувствительность бактерии к антибиотику?

4. Какие антибиотики разрешено использовать для консервирования пищевых продуктов?

5. Опишите определение концентрации антибиотика в морепродукте методом диффузии в агар (методом агаровых колодцев).

РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА

1. Дутова Е.Н., Гофтарп М.М., Призренова В.И., Сазонова А.С. Техническая микробиология рыбных продуктов. – М., 1976.– 266 с.

2. Кузьмина С.А. Техническая микробиология рыбных продуктов.– Калининград., 1989. – 186с.

3. Мудрецова-Висс К.А. Микробиология. М., Экономика., 1985. – 256 с.

4. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. М., Агропромиздат., 1987. – 259 с.

5. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований: Учебное пособие / Под ред. А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещиной. – М.: Медицина, 2004. – 576 с.

6. Овчарова Т.П., Масленникова Н.М. Антибиотики в пищевой промышленности. – М.: Изд-во «Пищевая пром-сть», 1969. – 102 с.

7. Перетрухина А.Т., Перетрухина И.В. Микробиология сырья и продуктов водного происхождения: - СПб, ГИОРД, 2005. – 320 с.

8. Перетрухина А.Т., Белокопытова Е.Е. Лабораторный практикум по санитарно-микробиологическому контролю на рыбоперерабатывающих предприятиях: Учеб. пособие. – Мурманск: МВИМУ им. Ленинского комсомола, 1987. – 151 с.

9. Постановление гл. сан. врача РФ «Гигиенические требования к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. СанПиН 2.3.2.1078-01» от 14 ноября 2001 г. - № 36.

10. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. – Часть 1. – М.: Отдел маркетинга АМБ-агро, 1998. – 309 с.

СОДЕРЖАНИЕ:

Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.

Глава 1. Исследование микрофлоры воды.

Краткие теоретические сведения. Микрофлора воды.

Санитарно-показательные организмы.

1.1. Отбор и транспортировка проб воды в лабораторию.

1.2. Санитарно-бактериологические показатели качества воды.

1.3. Определение кишечной палочки в воде. Характеристика кишечной палочки.

Определение титра кишечной палочки в воде.

1.3.1. Метод мембранных ультрафильтров.

1.3.2. Двухэтапный бродильный метод определения коли-титра воды.

Нестандартные методы санитарно-микробиологических исследований воды.

1.3.3. Трехэтапный бродильный метод

1.3.4. Бродильный метод по Звенигородской

1.3.5. Метод прямого посева (метод Марманна)

1.3.6.Ускоренный метод анализа воды (метод Рублевской водонапорной станции)

1.3.7. «Сигнальный» анализ хлорированной воды

1.4. Принципы обнаружения в воде патогенных микроорганизмов.

1.4.1. Ускоренные методы исследования воды

1.5. Необходимые материалы:

1.6. Контрольные вопросы:

Глава 2. САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВОЗДУХА

2.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора воздуха

2.2. Отбор проб воздуха

2.3. Исследование воздуха на санитарно-показательную микрофлору

Дата добавления: 2015-07-02