З. Определение интенсивности кислотообразования

Нитраты в нитриты.

Ж. Выявление способности бактерий восстанавливать

Е. Определение ферментов бактерий.

а) Определение липазы

Посев исследуемой культуры выполняют глубинным методом в желточно-солевой агар или штрихом по его поверхности. Термостатируют при 37°С несколько суток. Вокруг жирорасщепляющих колоний появляется непрозрачная зона солей жирных кислот.

Поскольку жиры не смешиваются с водой, для приготовления сред используют твины - эфиры жирных кислот и сорбита. Твины 40, 60 и 80 содержат соответственно пальмитиновую, стеариновую и олеиновую кислоты. Состав среды в г/л: твин - 10 г, пептон - 10 г, NaCl - 5 г, CaCl₂*Н₂О - 0,1 г, агар - 20 г, pH 7,4. Водный раствор твина стерилизуют отдельно при 0,5 атм., а остальную среду - при 1,0 атм. Среду разливают в чашки Петри и после ее застывания материал высевают на поверхность штрихом или уколом. Посевы выдерживают в термостате при оптимальном для данного микроба режиме. На наличие липазы указывает образование вокруг колонии или штриха непрозрачной зоны кальциевых солей жирных кислот, освобожденных из твина.

б) Определение каталазы.

На поверхность колонии микроба, выращенного на плотной питательной среде, наносят каплю 1-3%-го раствора перекиси водорода и прикрывают стерильным покровным стеклом. При наличии каталазы появляются пузырьки газа (атомарный кислород), которые хорошо видны под стеклом.

К 10 мл исследуемого материала добавляют 1 мл раствора Грисса и доводят до кипения. В присутствии нитритов появляется красное окрашивание (т.к. реактив очень к ним чувствителен).

Реакция с цинк-иод-крахмалом. В лунку фарфоровой пластинки вносят 3 капли реактива, каплю 20%-й серной кислоты и каплю исследуемого материала. В присутствии нитритов появляется темно-синее окрашивание.

Приготовление реактива Грисса (состоит из двух растворов). Первый - 0,5 г сульфаниловой кислоты в 150 мл разбавленной уксусной кислоты, второй - 0,1 г a-нафтиламина в 20 мл воды с добавлением 150 мл разбавленной уксусной кислоты.

Цинк-иод-крахмаловая смесь: 4 г крахмала размешивают в небольшом количестве воды, доводят до кипения и при постоянном помешивании добавляют к кипящему раствору хлорида цинка (20 г ZnCl в 100 мл воды). Смесь кипятят до растворения крахмала, добавляют 2 г сухого йодистого цинка и доливают водой до литра. Раствор хранят в темной посуде в темном месте.

Реакция с метиленовым красным: к жидкой культуре бактерий в среде с углеводом добавляют индикатор метиленовый красный. При интенсивном кислотообразовании окраска культуры меняется на малиновый.

Реакция Фогес-Проскауера (реакция образования ацетилметилкарбинола): к жидкой культуре бактерий добавляют 40% -й раствор КОН. В присутствии ацетилметилкарбинола через несколько минут появляется розовое окрашивание.

Оксидазный тест: материал из исследуемой колонии наносится на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для определения оксидазной активности (30-40 мг a-нафтола непосредственно перед применением растворяют в 2,5 мл спирта-ректификата, добавляют 7,5 мл дистиллированной воды и растворяют 40-60 мг диметилфенилендиамида). Если через 2-4 минуты материал на фильтре посинел - бактерии считаются оксидазоположительными, если окраска материала не изменилась или он порозовел - бактерии оксидазоотрицательные. Реактив можно нанести непосредственно и на колонию. В этом случае оксидазоположительные колонии оксидазоположительных бактерий синеют, или вокруг них появляется синий ободок. Колонии оксидазоотрицательных бактерий не изменяются или розовеют.

Дата добавления: 2015-07-02