Способы и режимы стерилизации питательных сред, воды и посуды

Стерилизацией называется полное уничтожение микроорганизмов в каком-либо объекте: питательных средах, воде, посуде, инструментах и др.

Все подготовленные среды, вода для разведения, а также чистая посуда, применяемая для посева и выращивания микроорганизмов (пипетки, чашки Петри, пробирки, колбы), перед началом микробиологических исследований должны быть обязательно простерилизованы. Питательные среды стерилизуются тотчас после приготовления. Колбы и пробирки с питательными средами и водой перед стерилизацией закрывают ватными пробками. Ватные пробки выполняют роль фильтров и предохраняют простерилизованный материал от попадания посторонних микроорганизмов из воздуха.

Пробки должны быть прочными и долгое время сохранять свою форму. Ватные пробки можно готовить с помощью специальной машины для изготовления пробок. При отсутствии машины пробки готовят следующим образом: кладут на стол тонкий ровный слой ваты, загибают внутрь боковые края и получают ленту, по ширине равную длине пробки. Затем из этой ленты скатывают валик диаметром несколько меньше диаметра сосуда (рис. 13).

Ватные пробки обычно обертывают кусочком марли в один слой. Пробка должна хорошо и достаточно плотно входить в горло сосуда и выступать из него примерно на 3 - 4 см, чтобы ее легко было захватить пальцами.

Рис. 13. Приготовление пробок.

Пипетки, используемые для микробиологических работ, перед стерилизацией завертывают в бумагу. В широкий конец пипетки обычно вводится препаровальной иглой небольшой кусочек ваты так, чтобы ворсинки не выступали из отверстия пипетки. Бумага для завертывания пипеток отрезается длинными лентами шириной 5-10 см. Суженый конец пипетки кладут на край ленты под углом в 35-40° и концом ленты тщательно закрывают его. Затем завернутый конец пипетки зажимают пальцами левой руки и вращательными движением правой руки завертывают пипетку.

Иногда пипетки не завертывая помещают по нескольку штук в специальные металлические или стеклянные пеналы. Ватная пробка в пипетках обязательно должна сохраняться при их использовании, во избежание попадания в посеве посторонних микроорганизмов из ротовой полости. Чистую сухую посуду (чашки завернутые в бумагу) чаще всего стерилизуют в электросушильных шкафах «сухим жаром» при t - 150-160 °С в течение 1,5-2 часов. При таком режиме, как правило, убиваются не только вегетативные клетки микроорганизмов, но и наиболее термоустойчивые споры бацилл. После стерилизации посуду хранят завернутой в закрытых шкафах до момента использования.

Для питательных сред и воды используют стерилизацию нагретым паром. Различают два типа такой стерилизации: 1)стерилизация текучим паром и 2) стерилизация насыщенным паром под давлением.

Стерилизация текучим паром производится в кипятильнике Коха (или в автоклаве при открытом кране для выпуска пара). Аппарат Коха - это металлический цилиндр, накрываемый сверху крышкой с отверстием в ней для свободного выхода пара. На дно аппарата наливают воду и ставят подставку, на которую помещают стерилизуемые предметы.

Текучим паром осуществляют дробную стерилизацию (тиндализацию), которая производится при температуре 100 °С в течении 3-х дней подряд по 30-40 минут ежедневно. В промежутках между прогреваниями питательные среды оставляют при комнатной температуре или выдерживают в термостате для того, чтобы споры, которые оставались после кипячения, могли прорасти в вегетативные клетки, а возникающие молодые клетки уничтожают при повторном нагревании.

Недостатком тиндализации является ее длительность. Однако этим методом широко пользуются в лабораторной практике. Он является незаменимым для стерилизации сред, изменяющих свой состав и свойства при температуре выше 100 °С. Дробно стерилизуют молоко, среды с углеводами, среды с желатиной и др. Метод дробной стерилизации введен английским ученым Тиндалем.

Стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование) является самым быстрым и наиболее надежным способом. Она осуществляется в специальном приборе - автоклаве (рис. 14), который представляет собой двустенный герметически закрывающийся котел. Он снабжен воронкой для наливания воды, краном для выпуска воздуха и пара, манометром для определения давления пара внутри котла и предохранительным клапаном.

При стерилизации в автоклаве порядок работы следующий:

1.Заливают через воронку воду до метки (уровень воды виден через водомерное стекло) и внутрь на специальную подставку помещают стерилизуемые предметы.

2.Закрывают крышку автоклава и открывают кран для выхода воздуха и пара.

3.Включают автоклав в электрическую сеть.

4.После закипания воды начинает выходить сильная струя пара из крана. После полного удаления воздуха паром (продувка автоклава) закрывают кран и следят по манометру за давлением. Время стерилизации отмечают с момента установления необходимого давления. Большинство питательных сред, а также водопроводную воду в автоклаве стерилизуют при 1 атм в течение 20-30 мин., что соответствует t = 121 °С. Такая температура убивает не только бактерии, но и их споры. Легко разрушающиеся и карамелизующиеся среды (молоко, сусловый агар, агар Чапека и др.) стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 20-30 мин., что соответствует t = 112 °С.

5. После окончания стерилизации автоклав отключают, осторожно выпускают пар, отвинчивают крышку и достают простерилизованные материалы.

Если кран будет открыт слишком рано, то стерилизуемая жидкость может вскипеть и выбросить ватные пробки.

Холодная стерилизация осуществляется фильтрованием через специальные мелкопористые фильтры в заранее простерилизованную посуду. Этот прием холодной стерилизации применяется для тех питательных сред, которые изменяют свой состав и свойства даже при незначительном нагревании.

Сущность этого метода стерилизации основана на том, что малые поры фильтра легко пропускают раствор, но задерживают микроорганизмы, за исключением ультрамикробов (вирусов и бактериофагов).

Бактериальные фильтры готовят из разных материалов. Наиболее часто употребляются фильтры из фарфоровой глины, асбеста и мембранные ультрафильтры. Химический метод стерилизации называется дезинфекцией. Дезинфекция - это способ уничтожения микроорганизмов при помощи сильно действующих химических веществ-антисептиков.

Бактерицидное действие проявляют многие окислители: хлор, перекись водорода, пермаганат калия, неорганические кислоты – сернистая борная, органические соединения – формалин, фенолы, этиловый и бутиловый спирты и др. В лабораторной практике дезинфекцию применяют для обеззараживания рабочего стола, рук, инструментов и т.д.

Дата добавления: 2015-06-27