Диагноз на клебсиеллез ставится на основании эпизоотических данных, клинических признаков, патизменений и результатов лабораторного исследования

Эпизоотологические данные. Источник возбудителя инфекции — больные животные (телята, поросята) и свиноматки-бактерионосители. Возбудителя выделяли из носовой слизи, при кашле, экссудата из глаз, фекалий.

Заболевание наблюдается в любое время года, но преимущественно в осенне-зимний период во время массовых отелов. Наиболее восприимчив молодняк. Болезнь протекает энзоотически. Во внешнюю среду он выделяется с экскрементами, слизью из носа, молоком. Заражение происходит алиментарно и воздушно-капельным, контактным путем. Телята могут заражаться через молоко. Контаминированное возбудителем молозиво, питьевая вода, подстилка и предметы ухода за животными служат факторами передачи инфекции.

Течение и симптомы болезни. Инкубационный период длится от нескольких часов до 5 дней. Болезнь протекает остро, подостро и хронически.

Заболевают поросята обычно через 8-10 дней после отъема от свиноматок, однако нередки случаи болезни поросят под матками до 20-дневного возраста. Они представляют особую опасность как источник возбудителя инфекции при переводе их на групповое содержание. Преобладающие формы болезни для поросят - респираторная и септическая.

Телята, как правило, заболевают в профилакторный период энтеритной формой. Редко отмечают респираторную форму клебсиеллеза у телят с 20-дневного возраста.

По последним данным, клебсиеллез может развиваться как вторичная инфекция на фоне поражения молодняка вирусами (рота- и корона-), что приводит к более высокой заболеваемости и летальности животных.

При остром течении у телят повышается температура тела до 40°С, развиваются угнетение, анорексия и диарейный синдром. Фекальные массы - зловонные, жидкие, от светло-желтого до серого цвета.

У поросят повышается температура тела до 40,5-41°С. Животные угнетены, дыхание затрудненное, учащенное, болезненное, возникают приступы кашля, напряженность и болезненность брюшной стенки, у некоторых животных появляется рвота и диарея. Поросята стараются принять позу, позволяющую снизить давление на грудную клетку (широко расставляют конечности).

При септической форме развивается еще более выраженные лихорадка и угнетение. Гибель наступает через 2-4сут.

При подостром течении симптомы болезни нарастают медленнее, клинические признаки менее выражены. Подострое и хроническое течение клебсиеллеза как у поросят, так и у телят более характерны при респираторной форме.

Патологоанатомические изменения. У погибших при остром течении болезни видимые слизистые оболочки бледные, цианотичные. Обнаруживают признаки острого катарального энтерита, увеличение лимфоузлов брюшной полости, дистрофию печени. При септической форме отмечают слипчивость кишечника и отек легких с участками катаральной бронхопневмонии. Печень несколько кровенаполнена, селезенка, как правило, увеличена в 2—4 раза, дряблой консистенции.

Лабораторная диагностика клебсиеллеза включает выявление чистой культуры возбудителя болезни и изучение его морфологических и тинкториальных, культуральных, гемолитических, биохимических и патогенных свойств.

Для посмертной бактериологической диагностики клебсиеллеза в лабораторию направляют 2-3 свежих мелких трупа или убитых с диагностической целью больных животных (желательно не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами).

От трупов крупных животных посылают: сердце, перевязанное лигатурой вблизи разреза сосудов, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почки, голову (головной мозг), трубчатую кость, брыжеечные лимфатические узлы, регионарные, а также пораженный отрезок тонкого отдела кишечника, перевязанный с двух концов лигатурой. Кишечник вместе с регионарными лимфатическими узлами упаковывают отдельно.

Для прижизненной бактериологической диагностики направляют пробы фекалий. При невозможности доставки проб через 2 часа после взятия их консервируют глицериновым раствором.

Первый день - посевы из патматериала делают на МПБ, среду Эндо и (или) Левина, селективно-дифференциальную среду для выделения клебсиелл с инозитом (КЛЕД-агар). Содержимое тонкого отдела кишечника и фекалии засевают на плотные среды Эндо (или Левина), среду обогащения для клебсиелл К-2. Засеянные чашки и пробирки помещают в термостат (37°С) на 18-24 часа. Для выявления у культур клебсиелл капсулы окраску мазков проводят по методу Гинса (тушью).

Второй день - извлеченные из термостата чашки с культурами на агаре Эндо и (или) Левина, селективно-дифференциальной среде для выделения клебсиелл (КЛЕД-агар) просматривают и отбирают типичные для клебсиелл колонии (5 - выросших после посева фекалий или соскобов со слизистой кишечника и 5 из других органов и тканей, в том числе брыжеечных лимфатических узлов), а затем нумеруют их. Круглые, гладкие колонии с резко возвышающихся над поверхностью агара, диаметром 1,5 – 3,0 мм, красного и розового цвета с металлическим блеском или без него, на селективно-дифференциальной среде (с инозитом) для выделения клебсиелл колонии этого микроорганизма крупные сли­зистые, бледно- или ярко-желтые, диаметром 4-5 мм.

Из отобраных колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Клебсиеллы в мазках выглядят в виде мелких грамотрицательных палочек с закругленными концами, длинной 0,6-6,0 и 0,3-1,5 мкм шириной, расположенных одиночно, попарно или короткими цепочками.

Культуры, полученные в МПБ, в среде обогащения для клебсиелл К-2, пересевают на агар Эндо (или Левина), КЛЕД-агар в чашках Петри, которые помещают в термостат (37-38 °С) на 18-24 часа. Пересев из МПБ проводят в том случае, если отсутствует рост колоний на этих средах в первичных посевах из соответствующих органов и тканей.

Во всех случаях засеянные чашки и пробирки помещают в термостат (37⁰ С) на 16-20 часов.

Третий день — полученные на (КЛЕД-агаре), на агаре Эндо и (или) Левина культуры (после пересева с МПБ или среды обогащения для клебсиелл К-2), окрашивают по Граму, и микроскопируют. При условии чистой культуры пересевают на скошенный МПА для дальнейшего изучения по биохимическим тестам с целью родовой и видовой идентификации.

Четвертый день. Со скошенного МПА культуру засевают на среды Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой, дульцитом, маннитом, среду с мочевиной, агар Симмонса, среду с сернокислым железом Клиглера (тест на сероводород), бульон Хоттингера или МПБ (тест на индол), мясопептонную желатину и ПЖА (подвижность). Для изучения гемолитических свойств 5-6колоний засевают на чашку с кровяным агаром, разделенную на соответствующее количество секторов.

Для изучения патогенных свойств культур в биопробе проводится посев в 2 пробирки со скошенным МПА.

Засеянные пробирки инкубируют при 37°С течение 48 часов, ежедневно учитывая изменения в средах.

Пятый день - проводят предварительный учет результатов изучения ферментативных свойств культур и определяют на наличие гемолиза. Бактерии рода Klebsiella ферментируют с образованием кислоты и газа глюкозу, маннит, лактозу (за исключением отдельных штаммов), не растут на агаре Симонса, не расщепляют мочевину (кроме К. rhinoscleromatis), не выделяют индол (кроме К. oxytoca) и не образуют сероводород.

Культуры, отклоняющиеся по отдельным ферментативным свойствам от бактерий рода Escherichia, подвергают дополнительному изучению в соответствии с тестами и дифференциальной схемой, изложенными в "Методических указаниях по бактериологической диагностике ассоциированной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями".

Для биопробы используют две культуры на скошенном МПА. Каждую культуру смывают стерильным физ. раствором, готовят суспензии концентрации 1 млрд. микробных клеток/см³ по оптическому стандарту, затем смешивают их в равном объеме и вводят внутрибрюшинном по 0,5 см³ трем белым мышам массой 14-16 г или трем цыплятам 2, 3-х недельного возраста (при исследовании материала от птиц). Наблюдение за зараженными мышами проводят в течение трех суток.

Шестой день - проводят окончательный учет результатов изучения ферментативных свойств культур, предварительный учет результатов биопробы.

Седьмой день - проводят предварительный учет результатов биопробы.

Восьмой день — окончательный учет результатов определения патогенных свойств культур клебсиелл в биопробе на мышах. Культуры, вызывающие гибель двух и более мышей и выделении из их органов культуры клкбсиелл считают патогенными.

Лабораторный диагноз на клебсиеллез считается установленным в каждом из следующих случаев:

- выделения чистых культур клебсиелл не менее чем из двух таких органов и тканей как: селезенки, крови сердца, костного мозга, головного мозга свежего трупа или убитого клинически больного животного без определения их патогенности для белых мышей;

- выделения из патологического материала культур клебсиелл, обладающих патогенностью для белых мышей;

Срок бактериологического исследования до 7 суток.

Первичная идентификация эитеробактерий по биохимическим реакциям в комбинированной среде и выбор тестов для установления родовой принадлежности

Реакция в среде Олькеницкого или Клиглера	Предполагаемые энтеробактерии	Тесты и субстраты для установления рода
Лактоза и/или сахароза	Глюкоза	H2S	Мочевина**
-	КГ	+	-	Виды Salmonella, Citrobacter, Edwardsiella	Индол, сорбит, лизин декарбоксилаза, пробы с поливалентными сыворотками к сальмонеллам
+	К	-	-	Е.coli, виды Citrobacter или не энтеробактерии	Цитрат Симмонса, мочевина (по Преусу или), восстановление нитратов, тест на цитохром оксидазу
+	КГ	-	-	Е.coli, виды Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia	Цитрат Симмонса, подвижность, индол, реакция Фогеса-Проскауера, проба с метиловым красным, лизин декарбоксилаза, орнитин декарбоксилаза, мочевина (по Преусу или Кристенсену)
+	КГ	+	-	Виды Citrobacter, Proteus, Yersinia	Тесты для идентификации видов; фенилаланин дезаминаза
-	К	-	-	Виды Shigеlla, некоторые серовары сальмонелл	Подвижность (при 37 ^оС и 22 ^оС), индол, натрия ацетат, фенилаланин дезаминаза, лизин декарбоксилаза, мочевина (по Преусу или Кристенсену), реакция Фогеса-Проскауера и проба с метиловым красным (при 22^оС), серологические пробы с антисыворотками к сальмонеллам
-	КГ	+	-	Salmonella, виды Shigella flexneri, Providencia stuartii, виды Serratia	Подвижность (при 37 ^оС и 22 ^оС), индол, ацетат Na, фенилаланин дезаминаза, лизин декарбоксилаза, реакция Фогеса-Проскауера и проба с метиловым красным (при 22^оС), пробы с поливалентными сальмонеллёзным и дизентерийным фагами, серологические пробы с поливалентными сыворотками к сальмонеллам
-	К	+	-	S. typhi и некоторые другие серовары сальмонелл	Проба с поливалентными сыворотками к сальмонеллам (для идентификации сероваров)
-	-	-	-	Не энтеробактерии	Тесты для идентификации видов; фенилаланин дезаминаза
+	-	-	-	Не энтеробактерии	Тесты для идентификации видов; фенилаланин дезаминаза

Примечание. * - сведения по роду не включены, так как при обычном (37 ^оС) культивировании посевов на твёрдых средах указанные энтеробактерии не растут или дают замедленный скудный рост.

**- при использовании среды Олькеницкого; при выращивании на среде Клиглера проводят параллельный посев в среду с мочевиной (по Преусу или Кристенсену).

К - ферментация глюкозы до кислоты без газообразования; КГ - ферментация глюкозы с образованием газа

Дифференциальные признаки энтеробактерий по биохимическим свойствам

№ п/п

Тесты

РОДЫ И ВИДЫ БАКТЕРИЙ

Escheri-сihia coli

Citrobacter

Enterobacter

Klebsiella pneumo-niae

Salmonella

Proteus

Morganella morganii

Yersinia enterocolitica (t^о 22-25^оC)

freundii

diversus

aerogenes

cloacae

vulgaris

мiгаbilis

мухоfaciens

Основные

1.

Глюкоза

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

2.

Лактоза

(±)

(±)

(±)

(±)

(±)

+

-

-

-

-

-

-

3.

Сахароза

±

±

±

+

±

+

-

+

±

+

-

+

4.

Маннит

+

+

+

+

+

+

+

-

-

-

-

+

5.

Мальтоза

±

+

+

+

+

+

+

+

-

+

-

+

6.

Рост на агаре Симонса

-

+

+

+

+

+

(±)

±

+

±

-

-

7.

Образование индола

±

-

+

-

-

±

-

+

-

-

+

±

8.

Образование сероводорода

-

+

-

-

-

-

(±)

+

+

-

-

-

9.

Расщепление мочевины

-

±

+

-

+

+

-

+

+

+

+

+

10.

Разжижение желатины

-

-

-

±

-(+)

-

-

+

+

+

-

-

11.

Дезаминирование фенилаланина

-

-

-

-

-

-

-

+

+

+

+

-

Дополнительные

1.

Реакция с метилротом

+

+

+

-

-

±

+

+

+

+

+

-

2.

Реакция Фогес-Проскауэра

-

-

-

+

+

±

-

-

±

+

-

+

3.

Подвижность

±

(±)

(±)

+

+

-

(±)

+

+

+

(±)

+

Обозначения:

«+» - ферментация сахара, образование индола, расщепление мочевины и т.д.

«(+)»- замедленное разжижение желатины

«-» - отсутствие ферментации сахара, образования индола, расщепления мочевины и т.д.

«±» - различные показатели

«(-)» - отдельные штаммы не вызывают ферментации сахара, образования индола и т.д.

Схема бактериологического исследования патологического материала на ассоциированную кишечную инфекцию

Дата добавления: 2014-01-20