V этап (через 24-36 час от начала исследования)

1. Отбирают культуры на ПУС, принадлежащие к роду Vibrio (по изменению цвета столбика при сохранении цвета скошенной части без образования газа не образующие сероводород и образующие индол);

2. Культуры, выросшие на ЩА, проверяют на наличие индофенолоксидазы.

3. Определяют морфологию микроорганизмов и чистоту отобранных культур, выросших на ЩА и ПУС, с помощью окрашенных по Граму мазков, проверяют подвижность в препарате «раздавленная» капля.

4. Культуры, дающие характерные изменения на ПУС и положительные в пробе на оксидазу, проверяют в ориентировочной слайд-агглютинации с холерными сыворотками 01 в разведении 1:100, РО, Инаба и Огава в разведении 1:50. При отрицательных результатах с этими сыворотками ставят слайд-агглютинацию с холерной сывороткой 0139 серогруппы.

5. Проводят идентификацию выделенных на ПУС на ЩА агглютинирующихся или не агглютинирующихся сыворотками 01, RО,

или 0139 серогрупп оксидазопозитивных культур по сокращенной или полной

схеме.

Сокращенная схема предусматривает:

1. изучение культуры в развернутой реакции агглютинации с холерными сыворотками 01, RО, Инаба и Огава;

2. определение чувствительности к диагностическим бактериофагам классическому и эльтор;

3. отношения к глюкозе в среде Хью-Лейфсона;

4. отношения к сахарозе, манниту, маннозе и арабинозе в средах Гисса.

Культуры оксидазопозитивных, активно подвижных вибрионов, расщеп-ляющие глюкозу в среде Хью-Лейфсона до кислоты без газа, ферментирующие сахарозу, маннозу, маннит в средах Гисса и не ферментирующие арабинозу, агглютинирующиеся не менее чем до ½ титра сыворотками 01 и одной из вариантно-специфических сывороток, относят к V.cholerae 01 серовара Огава или Инаба.

Культуры, агглютинирующиеся обеими варианто-специфическими сыворотками не менее чем до ½ титра, относят к серовару Гикошима.

Для подтверждения выделенной культуры холерных вибрионов к 0139 серо-группе достаточно положительного результата в слайд-агглютинации с 0139 сывороткой.

Полная схема идентификации культур, агглютинирующихся холерными сыво-ротками 01 серогруппы, предусматривает изучение их по дополнительным тестам, определяющим принадлежность к биовару (гемагглютинация, чувствительность к полимиксину, биовароспецифическим фагам, реакция Фогес-Проскауэра), определение антибиотикограммы и эпидемической значимости по чувствительности к ctx⁺ и ctx^- фагами на гемолиз, а в специализированных учреждениях, кроме того, по результатам исследования в ПЦР, методом молекулярного зондирования на наличие гена холерного токсина и определения холерогенности на модели кроликов-сосунков.

Дата добавления: 2014-01-20