Формалиновая фиксация

Формалин взаимодействует главным образом с основными (щелочными) аминокислотами, образуя метиленовые мостики, сшивающие молекулы. Важное значение для адекватной фиксации имеют два параметра: величина рН и осмолярность раствора. На практике соблюдение этих параметров зависит от задач и методов исследования.

Самый простой вариант фиксатора – 10% раствор промышленного формалина на водопроводной воде. Промышленный формалин представляет собой 40% насыщенный раствор формальдегида, именно в такой форме он получается в результате промышленного производства. Такой раствор для удобства считают 100%-ым. Т.е., рабочий фиксирующий раствор соответствует 4% раствору формальдегида. Величина рН такого фиксатора около 8 единиц, а осмолярность очень низка. Очевидно, что такая фиксация не обеспечивает адекватной сохранности цитологических структур. Однако, она широко используется, в первую очередь – для патоморфологических исследований в медицине. Таким же раствором заливается анатомический материал. Преимущество такой фиксации – быстрота и простота приготовления фиксатора, его дешевизна.

Параформальдегид ( параформ) - удобный источник для получения формальдегида. Представляет собой смесь продуктов полимеризации формальдегида (полиоксиметиленов) общей формулы [—CH₂O—] _n (n = 8 — 100); кристаллическое вещество белого цвета. Фиксатор из параформа готовят, нагревая его взвесь в соответствующем растворителе (буферном растворе).

Нейтральный формалин готовят следующим образом:

К 1 л имеющегося в продаже 40%-ного раствора формалина добавляют 100 г молотого мела или углекислой магнезии. Полученный раствор несколько раз в течение дня перемешивают, а затем отстаивают, после чего с помощью 0,1 Н HCl или 0,1 Н NaOH доводят значение pH раствора формалина до 7,0.

Степень усложнения формалинового фиксатора начинается с доведения рН водного раствора до физиологических значений 7,2-7,4. Затем следует большое число вариантов фиксатора, когда используют буферные растворы и соблюдают осмолярность.

В нашей практике мы используем универсальный фиксатор, который готовится из параформальдегида на солевых растворах, используемых при культивировании клеток. Очевидно, что эти растворы по своему составу наиболее адекватны внутренней среде живых клеток. Для работы готовится 4% раствор параформальдегида. Величину рН нужно контролировать, поскольку разные партии параформа могут ее изменять.

Условия фиксации должны обеспечить наименьшую скорость разложения ткани в глубине образца, поэтому фиксацию образцов рекомендуется проводить при +4С. Величина кусочков зависит от задач исследования, для электронной микроскопии берут небольшие образцы.

Дата добавления: 2014-01-11