Определение резус-принадлежности

Методики определения групп крови по системе АВО

I. Метод с использованием известных стандартных гемагглютинирующих сывороток.

II.Метод с использованием известных стандартных эритроцитов.

I. По известным сывороткам. На пластинку в три точки под обозначением анти-А, анти -В, атни-АВ помещают по две капли (0,1 мл) реагента -гемагглютинирующую сыворотки или взвесь цоликлонов и рядом по одной капле исследуемой крови (0,01-0,02 мл при использовании гемагглютинирующих сывороток; 0,02-0,03мл при использовании цоликлонов). Пластинку постоянно покачивают, наблюдая за ходом реакции в течение 3 мин при использовании цоликлонов; 5 минут при использовании гемагглютинирующих сывороток. По истечении 5 минут в реагирующую смесь добавляют 1-2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов.

Интерпретацию результатов производят по таблице.

Агглютинация эритроцитов с реагентом	Кровь принадлежит к группе
Антика	Антикв	Анти-АВ
-	-	-	О(I)
+	-	+	A(II)
-	+	+	B(III)
+	+	+	AB(IV)

При наличии агглютинации со всеми тремя реагентами необходимо провести исследование с сывороткой группы АВ(IV). Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в сыворотке АВ(IV).

2. По известным эритроцитам. Стандартные эритроциты приготавливают из крови доноров с заранее известной группой крови, хранят при t° 4-8°С. Срок годности 2-3 дня.

Исследуемую кровь центрифугируют для получения сыворотки. Затем в три ряда с 10 каплями исследуемой сыворотки помещают по 1-2 капли взвеси известных стандартных эритроцитов, смешивают и наблюдают в течение 5 минут.

Интерпретацию результатов производят по таблице.

Агглютинация реагентов с эритроцитами	Кровь принадлежит к группе
O(I)	A(II)	B(IV)
-	+	+	О(I)
-	-	+	A(II)
-	+	-	B(III)
-	-	+	AB(IV)

В серологических лабораториях чаще используют метод перекрестного определения группы крови, т.е. одновременное использование обоих способов.

Для определения резус-принадлежности используют антирезусную стандартную сыворотку, содержащую антитела к резус белку.

Антирезусную сыворотку приготавливают из крови женщины, у которой в анамнезе при беременности имелся факт резус-конфликта.

Наносят большую каплю (около 0,1 мл) антирезусной сыворотки на пластинку, рядом маленькую (в пять раз меньшую) каплю исследуемой крови, смешивают и покачивают пластинку. Не смотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 сек., результаты реакции учитывают через 3 мин после смешения. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии - как резус отрицательная.

Причины ошибок при определении групп крови и резус-принадлежности.

1. Технические ошибки:

а) Ошибочный порядок расположения реагентов. Каждый раз при определении групп крови и резус-принадлежности следует проверять расположение реагентов, а также визуально оценить их качество, исключить использование помутневших, частично высохших реагентов, реагентов с истекшим сроком годности.

б) Температурные условия. Определение групп крови производят при t° не ниже 15°С и не выше 25°С.

в) Соотношения реагентов и исследуемых эритроцитов. Оптимальные соотношения эритроцитов к сывороткам - 1:10., при использовании цоликлонов и сывороток -2:10.

г) Продолжительность наблюдения. Агглютинация эритроцитов появляется в течение первых 10 сек, однако наблюдение за ходом реакции следует проводить не мене 5 минут.

2. Трудноопределяемые группы крови.

а) Подгруппы крови. Антиген А может быть представлен двумя вариантами - А₁ и А₂, что может привести к ошибочной интерпретации результатов исследования. Антиген В таких различий не имеет.

б) Кровяные химеры. Кровяными химерами называют одновременное пребывание в кровяном русле двух популяций эритроцитов, отличающихся по группе крои и другим антигенам. Установление группы крови при кровяных химерах затруднено, поскольку в некоторых случаях половина эритроцитов, циркулирующих в кровяном русле, имеют одну группу крови, а другая половина - другую.

в) Неспецифическая агглютинация эритроцитов. О ней судят на основании способности эритроцитов агглютинироваться сыворотками всех групп, включая АВ (IV). Наблюдается при аутоиммунной гемолитической анемии и других аутоиммунных заболеваниях.

г) Другие особенности. Определение групп крои может быть затруднено у больных с изменениями свойств эритроцитов при различных патологических состояниях: это может выразиться в повышенной агглютинабельности эритроцитов у больных циррозом печени, при ожогах, сепсисе.

У некоторых новорожденных антигены А и В на эритроцитах выражены слабо, а соответствующие агглютинины сыворотки крови отсутствуют.

Дата добавления: 2014-11-06