Дослід 2. Визначення наявності білків у розчині методом осадження сульфосаліциловою кислотою

Визначення оптичної густини забарвлених розчинів у залежності від їх концентрації.

Практична робота

Кожна речовина має свій спектр поглинання з максимумом при певній довжині хвилі. Тому концентрації розчинів різних речовин вимірюють при довжині хвилі, що відповідає максимуму поглинання.

Дослід 1.Виміряти оптичну густину (А) розчину, що містить різну кількість фосфору.

Принцип методу. Фосфати в розчині сульфатної кислоти утворюють з молібдатами фосфорно-молібденові комплекси, які відновлюються до молібденової сині. Кількість фосфатів визначають колориметрично (за інтенсивністю забарвлення) за реакцією утворення комплексної фосфорно-молібденової кислоти та її відновлення до молібденової синьки.

Матеріальне забезпечення: стандартний розчин фосфору 0,32 мM, молібденовий реактив, пробірки, піпетки, фотоелектроколориметр (ФЕК).

Хід роботи: У п’ять пробірок додають розчини у кількостях, наведених нижче в таблиці:

№ з/п	Назва реактивів	№ пробірки
	Стандартний розчин фосфору 0,32 мM, мл	-	0,5	1,0	2,0	3,0
	Дистильована вода, мл	5,0	4,5	4,0	3,0	2,0
	Молібденовий реактив, мл	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0
	Концентрація фосфору, мкмоль/мл		0,16	0,32	0,64	0,96
	Оптична густина (А)

Розчини змішують і не раніше, ніж через 2 хв, але не пізніше, ніж через 5 хв, вимірюють величину оптичної густини на ФЕКу, використовуючи червоний світлофільтр. За результатами вимірювань будують графік залежності оптичної густини від концентрації фосфору в мкмоль/мл.

Зробити висновок. Пояснити вплив концентрацій речовин на величину оптичної густини.

Принцип методу. Білки легко осаджуються із водного розчину мінеральними, органічними кислотами та солями важких металів. Денатурація і осадження білка кислотами зумовлюється нейтралізацією поверхневого заряду колоїдних частинок білка, руйнуванням гідратної оболонки білкових молекул та утворенням комплексних солей білка з кислотами. Важкі метали утворюють стійкі комплекси з SH-групами білків, що викликає зміни структури та втрату розчинності білка. Особливо чутливою реакцією на наявність білка в розчині є осадження три хлорацетатною (ТХАК) та сульфосаліциловою кислотою (чутливість останньої реакції складає 1:50000). Крім того, сульфосаліцилова кислота здатна осаджувати поряд з високомолекулярними білками, низькомолекулярні білки та продукти розпаду білків – поліпептиди і олігопептиди.

Матеріальне забезпечення: пробірки, розчин білка, 20 % - ний розчин сульфосаліцилової кислоти.

Хід роботи: У пробірку наливають 1,0 мл досліджуваного розчину білка та додають 3 – 5 крапель 20 % - го розчину сульфосаліцилової кислоти. Спостерігають за утворенням осаду білка.

Клініко-діагностичне значення. Реакція з сульфосаліциловою та трихлорацетатною кислотами використовується для якісного та кількісного визначення білка в сечі.

Здатність білка міцно зв’язувати іони важких металів використовується в клінічній практиці. Білок використовують як протиотруту при отруєннях солями ртуті, свинцю тощо. У разі отруєння солями важких металів хворому дають велику кількість білка (яєчного білка або молока). В шлунку утворюються нерозчинні комплекси металів з білками, внаслідок чого припиняється всмоктування отрути в кров, послаблюється інтоксикація та посилюється їх виведення з організму.

Дата добавления: 2014-11-25