Определение белка в ликворе

Унифицированный метод определения белка с сульфосалициловой кислотой и сульфатом натрия

Принцип. Интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Реактивы:

1) 6 %‑ный раствор сульфосалициловой кислоты;

2) 14 %‑ный раствор безводного сульфата натрия. Для анализа используют свежеприготовленную смесь равных объемов этих реактивов (рабочий раствор);

3) стандартный раствор альбумина – 1 %‑ный раствор: 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9 %‑ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствором хлорида натрия до метки. Реактив нестойкий, поэтому для стабилизации к стандартному раствору прибавляют 1 мл 5 %‑ного раствора азида натрия (NaNз). При этом с условием хранения в холодильнике реактив годен к употреблению в течение 2 месяцев; 1 мл раствора содержит 10 мг альбумина;

4) 0,9 %‑ный раствор хлорида натрия.

Необходимое оборудование: фотоэлектроколориметр.

Ход реакции. В пробирку наливают 5 мл свежего рабочего раствора и 0,5 мл ликвора и перемешивают. Через 10 мин. интенсивность помутнения определяют на фотоэлектроколориметре в кювете с длиной оптического пути 1 см против контроля, длина волны 410–480 нм (сине‑фиолетовый светофильтр). В качестве контроля вместо реактива используется 0,9 %‑ный раствор хлорида натрия. Расчет ведется по калибровочному графику. Построение калибровочного графика: из стандартного раствора готовят разведения и обрабатывают их, как опыт. В 5 пробирок вносят соответственно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мл стандартного раствора альбумина и в каждую из них добавляют до объема 10 мл 0,9 %‑ного раствора хлорида натрия. Концентрация белка в этих растворах составляет соответственно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1 г/л.

Перед опытом рекомендуется поставить реакцию Панди (качественную пробу на белок), и если результат реакции характеризуется как 3+ или 4+ – значит, белка много. Нормальное содержание белка в ликворе из желудочков мозга 0,12– 0,2 г/л, из большой цистерны – от 0,1 до 0,22 г/л, при люмбальной пункции – от 0,22 до 0,33 г/л.

Повышение содержания белка отмечают при нарушении гемодинамики, органических поражениях ЦНС и оболочек мозга, воспалительных процессах. Наиболее характерно увеличение концентрации белка для экстрамедуллярно расположенных опухолей спинного мозга. Пониженное содержание белка в ликворе наблюдают при гиперсекреции ликвора и гидроцефалии.

Белок спинномозговой жидкости состоит из альбуминов и глобулинов, отношение глобулинов к альбуминам колеблется в пределах 0,2–0,3.

Унифицированный метод определения глобулинов осаждением карболовой кислотой (реакция Панди)

Принцип. Реакция основана на осаждении глобулинов насыщенным раствором карболовой кислоты.

При положительном результате в месте соприкосновения реактива со спинномозговой жидкостью возникает молочно‑белое облачко, переходящее в муть. Для обозначения результатов реакции Панди используется система четырех плюсов: слабая опалесценция – 1+, заметная опалесценция – 2+, умеренное помутнение – 3+, существенное помутнение – 4+.

Необходимо помнить, что реакция Панди осаждает такие белковые фракции, которые остаются не осажденными в реакции Ноне – Апельта, поэтому рекомендуется ставить обе реакции одновременно.

Способ Стольникова (см. табл. 4)

Таблица 4

Количество белка можно определить по предлагаемой таблице

Методика постановки реакции Ланге Различают 4 типа характера реакции Ланге:

1) нормальный;

2) дегенеративный, характеризующий патологические процессы в паренхиме мозга;

3) воспалительный, наблюдающийся при менингеально‑сосудистых воспалительных процессах;

4) смешанный (дегенеративно‑воспалительный).

Дата добавления: 2014-11-20