Микроскопическое исследование эякулята

Микроскопическое исследование эякулята включает в себя исследование нативных препаратов, подсчет количества сперматозоидов в счетной камере, определение подвижности сперматозоидов, количества живых и мертвых сперматозоидов, подсчет сперматограммы в окрашенных препаратах.

Микроскопическое исследование нативных препаратов. Не позднее чем через 1 час после эякуляции из разжиженного секрета готовят препарат, нанося пипеткой 1 каплю на чистое сухое предметное стекло. Покрывают эту каплю покровным стеклом и исследуют препарат сначала при малом увеличении (10Х20), а затем - при большом (10Х40).

При микроскопии изучают:

- клеточные элементы эякулята (сперматозоиды, клетки сперматогенеза, эритроциты, лейкоциты, макрофаги, клетки эпителия);

- неклеточные элементы (лецитиновые зерна, кристаллы Беттхера, амилоидные тельца, слизь).

Сперматозоиды представляют собой длинные (55-65мкм) подвижные клетки. В них различают головку, шейку (тело) и хвост. Форма головки овальная или грушевидная, сплюснутая в переднезаднем направлении, размером 5-6мкм. Бóльшую часть головки занимает ядро, хроматин которого состоит из 23 хромосом, ДНК несет 50% генетической информации. Впереди ядра располагается акросома, содержащая энзимы. Шейка короткая, переходит в тело и в хвост, содержащий фибриллы. Они обеспечивают движение хвоста и подвижность сперматозоида. Если в нативном препарате сперматозоиды не обнаруживаются, то эякулят центрифугируют при 3000об/мин в течение 10минут и из полученного осадка готовят препараты. При заболеваниях половых органов (простатите) может наблюдаться агглютинация (склеивание) сперматозоидов. Склеивание единичных сперматозоидов обозначается (1+). Если склеена половина сперматозоидов, но только головками - как (2+). Если половина сперматозоидов склеена хвостами и головками - как (3+), и склеивание почти всех сперматозоидов – как (4+). В нормальном эякуляте агглютинации не наблюдается.

Клетки сперматогенеза. Сперматогонии, сперматоциты и сперматиды в нативных препаратах плохо отличимы от лейкоцитов. Их исследуют в окрашенных препаратах. В норме они составляют 0,5-2%.

Эритроциты. В норме эритроциты отсутствуют или бывают единичными в препарате. Гемоспермия (наличие большого количества эритроцитов в сперме) может быть при воспалительных процессах половых органов.

Лейкоциты. Обычно в эякуляте встречаются единичные в поле зрения лейкоциты. Число их увеличивается при воспалительных процессах (эпидидимиты, простатиты, уретриты).

Эпителиальные клетки в нормальном эякуляте могут содержаться в незначительном количестве. Это клетки эпителия мочеиспускательного канала и придатка яичка. Эпителиальные клетки предстательной железы в норме не встречаются, в большом количестве появляются при воспалительных процессах.

Лецитиновые зерна – мелкие матовые образования округлой формы, в нормальном эякуляте содержатся в значительном количестве. Отражают гормональную функцию простаты. При простатите и раке простаты количество их уменьшается, иногда до полного исчезновения.

Кристаллы Беттхера имеют вид бесцветных вытянутых ромбов, представляют собой фосфорнокислую соль спермина. Большое количество их свидетельствует о простаторее.

Амилоидные тельца (конкременты) имеют овальную или округлую форму, характерное слоистое строение с концентрической исчерченностью и мелкозернистую центральную часть. Обнаруживаются при застое секрета предстательной железы, простатите.

Слизь в нормальном эякуляте отсутствует. При простатите появляется большое количество густой слизи, которая обволакивает сперматозоиды и делает их неподвижными.

Микроскопия эякулята в норме: обнаруживают большое количество подвижных сперматозоидов и лецитиновых зерен, могут содержаться эритроциты (единичные в препарате), лейкоциты (единичные в поле зрения) и незначительное количество эпителиальных клеток.

Определение количества сперматозоидов в 1мл и во всем эякуляте

Принцип. Подсчет обездвиженных сперматозоидов в камере Горяева.

Реактивы. Для обездвиживания сперматозоидов используется один из реактивов.

1. 1 мл 40% формалина на 100 мл воды.

2. 1мл 40% формалина + 5г натрия бикарбоната на 100 мл воды.

3. Жидкость Рубенкова: 0,1г основного фуксина + 0,02 краски Романовского + 0,2мл концентрированной карболовой кислоты + 0,1 мл глицерина + 2 мл 96% этилового спирта на 100 мл физраствора. Эта жидкость не только обездвиживает, но и окрашивает сперматозоиды, что позволяет изучить их морфологию

Ход исследования. В пробирку вносят 0,4 мл одной из обездвиживающих жидкостей и 0,02 мл (капилляр Сали) эякулята. Тщательно перемешивают содержимое пробирки и заполняют этой смесью камеру Горяева. Ждут 2-3 минуты для оседания клеточных элементов и подсчитывают сперматозоиды в пяти больших разграфленных квадратах, расположенных по диагонали. Подсчитывают только те сперматозоиды, головки которых лежат внутри квадратов.

Расчет. Подсчитанное число умножают на 10⁶, получая в результате количество сперматозоидов в 1мл эякулята. Затем умножают на объем эякулята и получают общее количество сперматозоидов.

Нормальное количество сперматозоидов: в 1 мл спермы содержится 100-150 ·10⁶ сперматозоидов, во всем эякуляте количество сперматозоидов превышает 120·10⁶, в среднем 150-450·10⁶.

Определение количества неподвижных сперматозоидов в счетной камере

Проводят после подсчета общего количества сперматозоидов в 1 мл. Сперма разводится теплым физраствором в 20 раз (0,02 мл спермы + 0,4 мл физраствора). Заполняют камеру Горяева и подсчитывают количество неподвижных сперматозоидов точно так же, как описано выше.

Расчет процентного содержания неподвижных сперматозоидов проводят, исходя из пропорции:

общее количество сперматозоидов в 1мл - 100%

количество неподвижных сперматозоидов - х.

В норме неподвижные сперматозоиды составляют не более 10%.

Подсчет кинезисграммы

Кинезисграмма– это процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью. Количество подвижных сперматозоидов является главным критерием при оценке их полноценности. Активно подвижные сперматозоиды обладают быстрым поступательным движением с перемещением в поле зрения. Мало подвижные сперматозоиды двигаются медленно, совершая колебательные движения или подергивания на месте. Исследование проводят с ограничителем поля зрения по Фонио.

Ход исследования. На сухое предметное стекло наносят каплю перемешанного эякулята и накрывают его покровным стеклом. Микроскопируют, подсчитывая не менее 100 клеток, отмечая количество активно подвижных (нормокинезис), мало подвижных (гипокинезис) и неподвижных (акинезис) сперматозоидов. Рассчитывают процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью.

Кинезисграмма в норме. В нормальном эякуляте активно подвижные сперматозоиды составляют 60-90%, мало подвижные – 10-20%, неподвижные – не более 10%.

Для общей визуальной оценки можно использовать шкалу в баллах:

4 - активная подвижность (все сперматозоиды обладают прямолинейной подвижностью со значительной скоростью);

3 – хорошая подвижность (большинство сперматозоидов обладает прямолинейной подвижностью, но скорость её снижена);

2 – посредственная подвижность (небольшое количество сперматозоидов движется поступательно);

1 – плохая подвижность (поступательное движение сперматозоидов отсутствует);

0 – полное отсутствие движения сперматозоидов.

Определение количества живых и мертвых сперматозоидов

Принцип. Метод основан на том, что раствор эозина окрашивает мертвые сперматозоиды, а живые не окрашиваются, так как содержащийся в них фермент дегидраза восстанавливает эозин, который при этом теряет окрашивающие свойства.

Ход исследования. На предметное стекло наносят 1 каплю спермы, рядом – 2 капли 5% водного раствора эозина. Капли смешивают, делают тонкий мазок, высушивают и микроскопируют с иммерсией. Подсчитывают не менее 200 клеток, выделяя при подсчете живые (бесцветные) и мертвые (окрашенные в красно-фиолетовый цвет) сперматозоиды.

В норме эякулят содержит не менее 90% живых сперматозоидов.

Микроскопическое исследование окрашенных препаратов (подсчет сперматограммы).Сперматограмма отражает соотношение количества сперматозоидов с нормальной и патологической морфологией.

Каплю хорошо размешанной спермы помещают на предметное стекло, делают из нее мазок, окрашивают по Паппенгейму и микроскопируют с иммерсией, дифференцируя не менее 200 сперматозоидов.

В норме морфологически неизмененные сперматозоиды составляют 80-85%.

К патологическим формам относятся сперматозоиды с деформированной головкой (макро-, микро-, конические головки, клювовидные, двуглавые с одной шейкой и одним хвостом, без шейки), с несколькими хвостами, без хвоста и т.д.

Дата добавления: 2014-11-29