Метод исследования в свете люминесценции

Метод исследования в свете люминесценции (люминесцентная микроскопия, или флуоресцентная микроскопия) состоит в наблюдении под микроскопом зелено-оранжевого свечения микрообъектов (рис.18), которое возникает при их освещении сине-фиолетовым светом или не видимыми глазом ультрафиолетовыми лучами. В оптическую схему микроскопа вводятся два светофильтра. Один из них помещают перед конденсором. Он пропускает от источника-осветителя излучение только тех длин волн, которые возбуждают люминесценцию либо самого объекта (собственная люминесценция), либо специальных красителей, введённых в препарат и поглощённых его частицами (вторичная люминесценция). Второй светофильтр, который установлен после объектива, пропускает к глазу наблюдателя (или на фоточувствительный слой) только свет люминесценции. В люминесцентной микроскопии используют освещение препаратов как сверху (через объектив, который в этом случае служит и конденсором), так и снизу, через обычный конденсор. Наблюдение при освещении сверху иногда называют «люминесцентной микроскопией в отражённом свете» (этот термин условен - возбуждение свечения препарата не является простым отражением света). Его часто используют совместно с наблюдением по фазово-контрастному методу в проходящем свете. Метод нашел широкое применение в микробиологии, вирусологии, гистологии, цитологии, в пищевой промышленности, при исследовании почв, в микрохимическом анализе, в дефектоскопии, иммунологии и паразитологии. Такое многообразие применений объясняется очень высокой цветовой чувствительностью глаза и высокой контрастностью изображения самосветящегося объекта на тёмном нелюминесцирующем фоне. Кроме того, информация о составе и свойствах исследуемых веществ, которую можно получить, зная интенсивность и спектральный состав их люминесцентного излучения, имеет огромную ценность.

Рис. 19

7. Капилляроскопия. В клинике применяется метод наблюдения капилляров в коже у живого человека, называемый капилляроскопией. Наблюдение обычно производится в области ногтевой складки пальцев руки, где капилляры расположены горизонтально и относительно поверхностно. Для просветления кожи на нее наносят каплю глицерина. С помощью осветителя О (рис. 19,а) обеспечивается сильное боковое освещение. Свет проникает на некоторую глубину просветленного слоя кожи, и в микроскопе М (в отраженном свете) наблюдаются петли капилляров (рис. 19,б), которые можно сфотографировать.

8. Счет форменных элементов крови. С помощью микроскопа производится счет форменных элементов крови. Для этого применяются специальные счетные камеры. Счетная камера (рис. 20,а) представляет собой тонкую стеклянную пластинку с круглым плоским углублением, на дне которого нанесена измерительная сетка (рис. 20,б). Камера укрепляется на предметном стекле.

а) б)

Рис. 20

В счетную камеру помещают каплю разведенной в 100 раз крови. Камеру закрывают сверху хорошо протертым покровным стеклом и ставят на предметный столик микроскопа. Сосчитывают форменные элементы в нескольких квадратах сетки, находят среднее, умножают его на переходный коэффициент и получают количество тех или иных элементов крови, отнесенное в 1 мм³ ее объема.

Дата добавления: 2014-12-24