Занятие № 16

Фаготипирование бактерий

Метод Аппельмана

Метод титрования фага

Опыт на жидкой питательной среде.

Делают посев исследуемой культуры в две пробирки с жидкой средой. В одну пробирку («О») добавляют петлёй диагностический бактериофаг. Через 18-20 часов в пробирке, куда бактериофаг не добавлялся («К»), наблюдается сильное помутнение бульона — произошел рост посеянной культуры. Бульон в пробирке, куда был добавлен бактериофаг, остался прозрачным вследствие лизиса культуры под его влиянием.

Титрование фагов проводится на культурах бактерий в жидких и плотных средах с целью определения их активности.

Данный метод основан на внесении одной и той же дозь'1 культуры гомологичных микробов в различные концентрации титруемого бактериофага в мясо - пептонном бульоне.

Готовят десятикратные разведения исследуемого бактериофага в МПБ. Для этого в ряд пробирок разливают по 4,5 мл МПБ. В 1-ю пробирку добавляют 0,5 мл исследуемого фага. Тщательно перемешивают и переносят в последующие пробирки (из пробирки в пробирку) по 0,5 мл соответствующего разведения фага с уменьшением его концентрации в десять раз.

Получают разведения 10^-1 степени и т.д. до 10^-9 степени. После этого в пробирки вносят по 1 капле суточной культуры соответствующих бактерий. За титр бактериофага принимают то его максимальное разведение, при котором наблюдается полный лизис культуры.

По признаку специфичности различают следующие бактериофаги: поливалентные, лизирующие культуры одного семейства или рода бактерий; моновалентные, лизирующие культуры только одного вида бактерий; типовые, способны вызвать лизис только определенных типов (вариантов) бактериальной культуры внутри вида бактерий.

Например, один штамм патогенного стафилококка может лизироваться несколькими типами фагов, поэтому все типовые фаги (24) и штаммы патогенных стафилококков объединены в 4 группы.

Метод фаготипирования имеет большое значение для эпидемиологического исследования, так как позволяет выявить источник и пути распространения возбудителей заболеваний. С этой целью определяют фаговар выделенной из патологического материала чистой культуры на плотных питательных средах с помощью типовых диагностических фагов.

Фаговар культуры микроорганизмов определяют по тому типовому фагу, который вызвал ее лизис.

ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА МИКРООРГАНИЗМЫ. АНТИБИОТИКИ. БАКТЕРИОФАГИ

Цель занятия:

Изучить характер влияния и механизмы действия биологических факторов на микроорганизмы; химиотерапевтические вещества.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Биологические факторы, влияющие на микроорганизмы.
2. Химиотерапия. Понятие о химиотерапевтических препаратах и химиотерапевтическом индексе. Принципы антимикробной терапии.
3. Микробный антагонизм, его механизмы. Микроорганизмы-антагонисты – продуценты антибиотиков.
4. Классификация антибиотиков по химическому строению, происхождению, механизму и спектру антимикробного действия, способам получения.
5. Методы изучения антибиотикочувствительности бактерий.
6. Механизмы лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней. Пути ее преодоления.
7. Осложнения антибиотикотерапии, их предупреждение.
8. Бактериофаги (умеренные и вирулентные). Принципы применения в медицине.
9. Эубиотики (пробиотики).

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• определять чувствительность бактерий к антибиотикам и бактериофагам; расшифровать антибиотикограмму и определить минимально-подавляющую концентрацию антибиотиков.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ

о возможности использования бактериофагов для выявления источников инфекции (эпидемическое маркирование – метод фаготипирования).

Дата добавления: 2015-04-25