Опыт 5. Реакция на креатинин с нитропруссидом натрия (реакция Вейля)

Креатинин - один из конечных продуктов азотистого обмена. Он образуется в мышцах из креатинфосфата, который, в свою очередь, получается из креатина и АТФ. За сутки с мочой выделяется 0,5-2 г креатинина. Увеличение выделения креатинина наблюдается при повышенной мышечной деятельности, лихорадке, сахарном диабете и других заболеваниях, связанных с интенсивным распадом белков тканей организма. Выделение креатинина уменьшается при мышечной атрофии, прогрессирующем поражении почек и др.

а) К 0,5 мл мочи добавляют 1-2 капли 5% раствора нитропруссида натрия и добавляют 1-2 капли 10% раствора гидроксида натрия. Креатинин с нитропруссидом натрия Na₂[Fe(CN)₅NO] в присутствии щелочи дает изонитрозокреатинин красного цвета, но соединение нестойкое — красная окраска быстро переходит в желтую.

б) При добавлении к содержимому пробирки нескольких капель концентрированной уксусной кислоты (до кислой реакции) красная окраска сменяется желтой.

Опыт 6. Количественное определение креатинина в моче по цветной реакции Яффе (метод Поппера).

Креатинин, взаимодействуя с хиноидной формой пикриновой кислоты, образует пикрат креатинина, который в щелочной среде превращается в свою таутомерную форму, имеющую оранжево-красный цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации креатинина.

В мерную колбу на 100 мл отмеряют из суточного количества 0,5 мл мочи и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Встряхивают и добавляют 0,2 мл 10% раствора гидроксида натрия. На 10 минут оставляют при комнатной температуре, после чего дистиллированной водой доводят объем до 100 мл. Оптическую плотность измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) против контроля.

Одновременно ставят контрольную пробу. В мерной колбе на 100 мл смешивают 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 10% раствора гидроксида натрия, доводят водой до метки.

Стандартная проба. В мерную колбу на 100 мл наливают 0,5 мл основного стандартного раствора креатинина и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Встряхивают и прибавляют 0,2 мл 10% раствора гидроксида натрия. Далее пробы обрабатывают так же, как и опыт.

Расчет производят по формуле:

,

где х - количество креатинина в суточной моче, мг; С_ст - количество креатинина в стандартной пробе, мг; D_оп — оптическая плотность опытной пробы; D_ст - оптическая плотность стандартной пробы; V_сут - суточное количество мочи; V - количество мочи, взятой для анализа.

Полученные данные сопоставить с нормальными величинами содержания креатинина в суточной моче. В норме содержание креатинина в моче у мужчин равно 1-2 г/сут (8,8-17,7 ммоль/сут), у женщин - 0,8-1,8 г/сут (7,1-15,9 ммоль/сут).

Контрольные вопросы

1. В каком виде аммиак и аминный азот попадают из периферических тканей в печень для образования мочевины?

2. Дефект какого из ферментов орнитинового цикла может быть причиной увеличения суточной экскреция аргининосукцината?

3. Почему при поражениях печени наблюдается аминоацидурия?

4. Приведите уравнения нейтрализации ацетоуксусной и b-гидроксимасляной кислот аммиаком.

Дата добавления: 2015-03-29