II посмертные методы

Б. Прижизненное исследование клеток в организме (in vivo)

1. Наблюдение структур в живом организме. Пример:с помощью специальных просвечивающих микроскопов-иллюминаторов можно наблюдать циркуляцию крови в микрососудах.

2.Метод вживления прозрачных камер в организм животного. Исследуемый объект помещается в прозрачную камеру (снабженную микроотверстиями для осуществления обмена веществ) и вживляется, чаще всего, в ушную раковину экспериментального животного. С помощью микроскопа можно наблюдать динамику изменения клеток и тканей в течение длительного времени.

3.Метод использования естественных прозрачных камер экспериментального животного, например передней камеры глаза, расположенной между роговицей и радужкой. Такой метод был использован для изучения ранних стадий развития зародыша, циклических изменений эндометрия и др.

4. Метод трансплантации – широко используется для изучения кроветворения. Клетки крови и костного мозга от здоровых животных пересаживаются животным, подвергнувшимся смертельному облучению. Экспериментальные животные выживают вследствие приживления донорских клеток, образующих в селезенке колонии кроветворных клеток (метод колониеобразования). Этим методом установлены источники развития для всех клеток крови.

Так как ткани в организме имеют приблизительно одинаковый коэффициент лучепреломления, то иногда с целью их дифференцировки прибегают к использованию прижизненных красителей.

К прижизненным красителям относятся: метиленовый синий, трипановый синий, конго-красный.

Прижизненные красители должны отвечать следующим требованиям:

1. Быть безвредными для организма.

2. Быстро выводиться из организма.

Окрашивание живых объектов имеет две разновидности:

1. Витальное (прижизненное окрашивание) -краситель вводят в организм животного, где он избирательно связывается с определенными клетками, органеллами, межклеточным веществом… Например, трипановый синий или литиевый кармин выявляют фагоциты; ализарин – новообразованный матрикс кости.

2. Суправитальное окрашивание – окрашивание живых клеток, выделенных из организма. Таким способом красителем бриллиантовым крезиловым синим выявляются молодые эритроциты (ретикулоциты), янусом зеленым – митохондрии, нейтральным красным – лизосомы.

Основным объектом посмертного метода исследования является гистологический препарат. Препарат может представлять собой:

- мазок (крови, костного мозга, слюны…)

- отпечаток (селезенки, печени, тимуса…)

- пленку (брюшины, плевры, мягкой мозговой оболочки…)

- срез

- шлиф (зуба, кости…)

Наиболее часто используют тонкие окрашенные срезы, заключенные в бальзам – так называемый постоянный гистологический препарат.

Дата добавления: 2015-04-30