Метод серийных разведений. Теоретическая справка

Теоретическая справка

Метод серийных разведений

Оценка результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методами дисков и серийных разведений

Методы изучения антибиотикочувствительности

Метод бумажных дисков (диско-дуффузионный)

Методика. Бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашку Петри.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посев инкубируют при 37°С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста бактерий определяют ее чувствительность к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов.

Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность методом серийных разведений.

Антибиотик	Метод дисков: диаметры зон задержки роста на среде АГВ (агар Гурьева-Васильева)	Метод серийных разведений: минимальная ингибирующая концентрация мкг/мл
Устойчивые	Умеренно устойчивые	Чувстви- тельные	Устойчивые	Чувстви- тельные
Бензилпенициллин	≤ 20	21-28	≥ 29	-	≤ 0.1
Ампициллин	≤ 20	21-28	≥ 29	-	≤ 0.2
Карбенициллин	≤ 14	15-18	≥ 19	≥ 32	≤ 16
Метициллин	≤ 13	14-18	≥ 19	-	≤ 3
Оксациллин	≤ 15	16-19	≥ 20	-	≤ 3
Цефалексин	-	-	-	≥ 32	≤ 10
Цефалотин	≤ 14	15-18	≥ 19	≥ 32	≤ 10
Стрептомицин	≤ 16	17-19	≥ 20	≥ 15	≤ 6
Неомицин	≤ 12	13-16	≥ 17	-	≤ 10
Канамицин	≤ 14	15-18	≥ 19	≥ 25	≤ 6
Мономицин	≤ 13	14-17	≥ 18	-	≤ 10
Гентамицин	≤15		≥ 16	≥ 6	≤ 4
Тетрациклин	≤ 16	17-20	≥ 22	≥ 12	≤ 2
Эритромицин	≤ 17	18-21	≥ 22	≥ 8	≤ 2
Линкомицин	≤ 19	20-23	≥ 24	≥ 8	≤ 2
Левомицетин	≤ 15	16-18	≥ 19	≥ 16	≤ 8
Рифампицин	≤ 12	13-15	≥ 16	≥ 8	≤ 2
Полимиксин	≤ 11	12-14	≥ 15	≥ 50 Ед/мл	-
Ристомицин	≤ 9	10-11	≥ 12	-	≤ 5

б) определить минимально-подавляющую концентрацию антибиотиков по отношению к культуре золотистого стафилококка (St. aureus). Выбрать антибиотик для лечения.

Гентамицин к.к. к. а/б к.б.

Разведения антибиотика

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

Результат:_________________________________________________________________

Ампициллин к.к. к. а/б к.б.

Разведения антибиотика

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

Результат:_________________________________________________________________

Вывод: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

Данным методом определяют минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) антибиотика рост исследуемой культуры бактерий.

Методика. Готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 10⁶-10⁷ бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации антибиотика.

Номер пробирки	Разведение антибиотика	концентрация антибиотика, мкг/мл	Исследуемая культура, мл	рост бактерий (помутнение среды)
	1:100		0,1	-
	1:200		0,1	-
	1:400		0,1	-
	1:800	12,5	0,1	-
	1:1600	6,25	0,1	+
	1:3200	3,12	0,1	+
	1 мл бульона без антибиотика	0,1	+ (контроль)

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по таблице, которая содержит значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

в) классифицировать антибиотики.

Название антибиотика	Классифика-ционное положение	Действующее начало	Получение	Применение	Способ применения

Работа № 4. Методы изучения бактериальных вирусов (фагов)

Цель работы: изучить методы применения в практической медицине диагностических и лечебно-профилактических бактериофагов.

Самостоятельная работа:

а) учесть результат опыта по определению родовой принадлежности исследуемой культуры, выделенной от больного с кишечной инфекцией с помощью диагностических бактериофагов.

Метод Отто («стекающей капли»)

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

б) определить источник инфекции у пациента с гнойным осложнением раны в хирургическом отделении.

Дата добавления: 2015-04-30