Устранение артефактов приготовления гистологических срезов

Приготовление гистологических срезов на ротационном микротоме

Приготовление гистологических срезов. Приготовление гистологических срезов на санном микротоме.

Оснащение: санный микротом, препаровальная игла, кисточка для снятия срезов, парафиновые блоки

Алгоритм действий:

-Фиксировать блок в объектодержателе так, чтобы длинная ось блока располагалась вдоль длинной оси микротома, а поверхность была горизонтальной.

-Установить лезвие/нож под углом 13-15 градусов

-Медленно подвести лезвие/нож к блоку

-При помощи макровинта регулировать высоту расположения блока до соприкосновения с ножом

-Установить микрометрическую шкалу на получение толстых срезов (20-25 мкм)

-Движением лезвия/ножа срезать верхний слой парафина и выровнять поверхность блока до тех пор, пока не начнут получаться первые полные срезы.

-Перевести микрометрическую шкалу на получение тонких срезов (6-8 мкм)

-Изготовить необходимое количество парафиновых срезов

-Монтировать срезы на стекло

Оснащение: ротационный микротом, препаровальная игла, кисточка для снятия срезов, парафиновые блоки.

Алгоритм действий:

1.Парафиновый блок закрепить в объектодержателе

2.Закрепить нож под углом 7-9 градусов

3.Перевести объектодержатель в среднее положение (на уровне лезвия ножа)

4.Подвести нож до соприкосновения с объектом

5.Установить микрометрическую шкалу на 20 мкм

6.Выровнять поверхность блока до тех пор, пока не начнут получаться первые полные срезы

7.Перевести микрометрическую шкалу на 6-7 мкм

8.Поворотом рукоятки микротома получить серию срезов (4-6 шт)

9.Монтировать срезы на стекло

Оснащение: ротационный микротом, препаровальная игла, кисточка для снятия срезов, парафиновые блоки

Вариант 1: срезы получаются слишком тонкие или толстые.

1. Причина: угол наклона лезвия слишком мал. Решение: отрегулируйте угол наклона

2. Причина: образец плохо зафиксирован (в ориентационной насадке или зажиме для кассет). Решение: проверьте, чтобы все винты и ручки, фиксирующие образец, были затянуты. Если необходимо, то затяните их еще раз. Проверьте, не двигается ли кассета, когда она закреплена в держателе. Это может быть связано с налипанием парафина и нехваткой смазки. Если причиной является налипший парафин, то удалите его с помощью небольшого количества ксиола или других соответствующих средств. Если нет, то смажьте машинным или вазелиновым маслом подвижные части зажима для кассет

3. Причина: микротомный нож или лезвие затупилось. Решение: используйте другие части режущего края или возьмите новый нож или лезвие

Вариант 2. Срезы сжатые

1. Причина: микротомный нож или лезвие затупилось. Решение: используйте другие части режущего края или возьмите новый нож или лезвие

2. Причина: к ножу/лезвию прилип парафин. Решение: очистите нож/лезвие с помощью щетки, смоченной в ксилоле. Во время чистки ведите щетку вверх по направлению от режущего края, но ни в коем случае не ведите ее вниз на режущий край.

3. Причина: блок слишком теплый. Решение: непосредственно перед микротомией, охладите блок при помощи специального спрея, на охлаждающей плате или в ледяной воде

4. Причина: угол наклона лезвия слишком велик. Решение: отрегулируйте угол наклона (постепенно уменьшайте угол наклона, пока не найдете оптимальный). Проверьте, зажат ли винт листовой пружины.

Вариант 3. Срезы имеют царапины или разрывы

1. Причина: дефект режущей поверхности. Решение: немного продвиньте лезвие и посмотрите, изменилось ли вместе с этим расположение царапин на срезе. Если царапины тоже сместились, то замените лезвие.

2. Причина: на край режущей поверхности налип парафин. Решение: очистите нож/лезвие с помощью щетки, смоченной в ксилоле. Во время чистки ведите щетку вверх по направлению от режущего края, но ни в коем случае не ведите ее вниз на режущий край.

3. Причина: износилось покрытие на режущем крае лезвия. Решение: попробуйте резать другим участком лезвия или поменяйте лезвие на новое.

Вариант 4. Не получается серия срезов

1. Причина: неверно выставлен угол наклона лезвия (лезвие слишком вертикально). Решение: отрегулируйте угол наклона (постепенно изменяйте угол наклона, пока не найдете оптимальный)

2. Причина: блок слишком теплый. Непосредственно перед микротомией, охладите блок при помощи специального спрея, на охлаждающей плате или в ледяной воде

3. Причина: ткань плохо проведена. Решение: проведите повторную проводку и заливку образца

4. Причина: неправильно выбран тип лезвия. Решение: используйте лезвие для серийных срезов с углом режущего края 35 градусов

5. Причина: лезвие затупилось. Решение: попробуйте резать другим участком лезвия или поменяйте лезвие на новое.

Вариант 5. На срезах появляются отверстия

1. Причина: ткань плохо проведена. Решение: проведите повторную проводку и заливку образца

2. Причина: на край режущей поверхности налип парафин. Решение: очистите лезвие с помощью щетки, смоченной в ксилоле. Во время чистки ведите щетку вверх по направлению от режущего края, но ни в коем случае не ведите ее вниз на режущий край.

3. Причина: поврежден режущий край лезвия. Решение: передвиньте лезвие или поменяйте его на новое.

Вариант 6. Срезы закручиваются

1. Причина: неверно выставлен угол наклона лезвия (лезвие слишком вертикально). Решение: отрегулируйте угол наклона ножа/лезвия

2. Причина: лезвие слишком острое. Решение: проведите тримминг лезвия, используя пустой парафиновый блок

3. Причина: неправильно выбран тип лезвия. Решение: используйте другие типы лезвий

Дата добавления: 2015-04-30