Методи менеджменту. Приклад очистка фермента метанолдегідрогенази з біомаси мікроорганізмів

Приклад очистка фермента метанолдегідрогенази з біомаси мікроорганізмів

Хід роботи

Матеріали та обладнання

Сировина та реактиви

- 2 свіжих курячих яйця;

- кристалічний сульфат амонію;

- насичений розчин сульфату амонію готують шляхом розчинення 757 г солі в 1 л води при слабкому нагріванні на водяній бані насиченого розчину сульфату амонію, закривают пробкою і старанно перемішують;

- 4%-на оцтова кислота, індикаторний папір.

- мірні циліндри з притертою пробкою на 50 та 100 мл;

- фільтрувальний папір;

- скляні палички;

- хімічні стакани на 50 мл, стакан на 500 мл;

- воронка Бюхнера

- водострумний насос;

- ваги;

- водяна баня;

- ступка з пестиками;

- штатив з 5 пробірками,

Білок 2 свіжих курячих яєць відділяємо від жовтків і вміщуємо в мірний стакан на 100 мл. Вимірюємо об¢єм (@??? мл). При постійному перемішуванні доливаємо такий же об¢єм насиченого розчину сульфату амонію. Добре перемішуємо скляною паличкою. При утворенні 50%-ного білкового розчину сульфату амонію випадають в осад глобуліни. Осад відфільтровують через складчатий фільтр або відділяють центрифугуванням.

Отриманий прозорий фільтрат розливають в скляні стаканчики по кількості бригад в групі і вимірюють одержаний об¢єм. Щоб, досягти 70%-не насичення розчину сульфатом амонію поступово додають добре розтертий порошок солі з розрахунку 13,5 г на 100 мл білкового розчину. При цьому отримують 70%-ний білковий розчин сульфату амонію, з якого випадає в осад альбумін.

Одержаний осад відфільтровують на воронці Бюхнера під вакуумом. Осад обережно знімають з фільтрувальної бумаги, змивають його залишки 3-4 мл дистильованої води і вимірюємо концентрацію білку біуретовим методом.

Етапи очистки	Vфракції, мл	Питома активність білку, мкмоль/хв × мгбілку	Кількість білку, г	Кратність очистки
Центрифугування		0,142
Хроматографія на ДЕАЕ-целюлозі		0,332	1,7	2,3
Фракціонування 55-70% розчином (NH4)2SO4		0,750	0,8	5,3
Хроматографія на сефадексі G-75		2,280	0,55	19,6
Хроматографія на сефадексі G-100		3,200	0,45	22,5
Хроматографія на сефадексі G-200		3,200	0,39	22,5

Кількість білку в грамах визначається як добуток його концентрації в розчині (мг/мл) на об¢єм розчину. Концентрацію білку визначають реакцією з біуретовим реактивом

Кратність очистки на кожному її етапі визначається як частка від ділення питомої активності білку на кожній стадії очистки на його питому активність на попередній стадії.

Висновки

ЛІТЕРАТУРА

1. Цыперович А.С. Ферменты.- К.: «Техніка».- 1971.- 358 стр.

2. Ленинджер А. Биохимия.- М.: «Мир».- 1974.- 957 стр.

3.Диксон М., Уэбб Э. Ферменты (в трех томах).- М.: «Мир».- 1982.

1. Сутність методів менеджменту.

2. Адміністративні методи менеджменту.

3. Економічні методи менеджменту.

4. Соціально-психологічні методи менеджменту

Дата добавления: 2015-05-23