Методические указания к практической работе

Минск

Микробиология, вирусология, иммунология».

Тема занятия: «Серологический метод исследования. Постановка реакции агглютинации на стекле. Иммунные препараты для специфической иммуно-профилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний»

Составила преподаватель Якимова Л.М.

Тема занятия: «Серологический метод исследования. Постановка реакции агглютинации на стекле. Иммунные препараты для специфической иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний»

Цели занятия: Познакомиться с практическим применением реакций иммунитета, освоить методику постановки реакции агглютинации на стекле и учет её результатов, познакомиться с иммунными препаратами для специфической иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний, условиями их хранения, овладеть навыками по подбору иммунных препаратов в соответствии с календарем профилактических прививок.

Самостоятельная работа:

1. знакомство с практическим применением реакции иммунитета

2. освоение методики постановки реакции агглютинации на стекле и учета её результатов

3. знакомство с иммунными препаратами для специфической иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний, условиями их хранения

4. овладение навыками подбора иммунных препаратов в соответствии с календарем профилактических прививок

5. Дезинфекция рабочего места и рук

Серологические реакции – это реакции, в основе которых лежит взаимодействие между антителами и антигенами (реакции иммунитета, иммунобиологические реакции).

Реакции иммунитета в силу высокой специфичности и чувствительности (способность антигенов реагировать только с гомологичными антителами, либо антител с гомологичными антигенами) нашли широкое применение при диагностике инфекционных заболеваний и в научных медико-биологических исследованиях. В реакциях иммунитета в качестве антитела обязательно участвует сыворотка больного человека или иммунного животного, поэтому они называются серологическими (от латинского serum - сыворотка). Серологические реакции используются для диагностики инфекционных заболеваний в двух направлениях:

1. Серодиагностика – выявления неизвестных антител в сыворотке больного с помощью известных антигенов (диагностикумов), представляющих собой взвесь живых или убитых микроорганизмов, выпускаемых микробиологической промышленностью.

2. Идентификация выделенной от больного чистой культуры микроорганизмов – определение неизвестных антигенов выделенной от больного чистой культуры микроорганизмов с помощью известных антител, содержащихся в иммунной сыворотке, выпускаемой микробиологической промышленностью.

В серологических реакциях участвуют антитела, принадлежащие главным образом к иммуноглобулинам классов IgG и IgM. К реакциям иммунитета относят реакции агглютинации (РА), преципитации (РП), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА) и другие. В основе всех этих реакций лежит взаимодействие антигенов с антителами, отличаются они друг от друга внешним проявлением. Так, реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев, реакция преципитации – образованием молочно-мутных колец (в жидкой фазе) или молочно-мутных линий (в плотной среде) и т.д.

Реакции иммунитета бывают:

1. простыми (двухкомпонентными) – реакция агглютинации и её модификации (пассивная гемагглютинация, латекс - агглютинация) и реакция преципитации

2. сложными (многокомпонентными) – РСК, ИФА, РИА, реакция нейтрализации антигенов, антител и др.

Реакция агглютинации (РА)

Агглютинация – склеивание и выпадение в осадок корпускулярных антигенов: бактерий, эритроцитов, а также частиц с адсорбированными на них антигенами под влиянием антител в среде с электролитом.

Реакция основана на взаимодействии поверхностных антигенов бактерий и других корпускулярных частиц с антителами и протекает в две фазы:

1. Специфическая фаза – связывание детерминантной группы (эпитопа) антигена с паратопом – активным центром иммуноглобулина (невидимая фаза).

2. Неспецифическая (видимая) фаза – образующийся комплекс АТ+АГ утрачивает растворимость и выпадает в осадок в виде хлопьев. Это явление возможно в электролитной среде (0,9% растворе хлорида натрия).

РА применяют для обнаружения специфических антител в сыворотке крови больного и, наоборот, при помощи стандартной агглютинирующей сыворотки можно идентифицировать выделенные микробы.

Характер и скорость реакции зависят от антигенного строения бактериальной клетки. Мелкозернистую О-агглютинацию дают бактерии, лишенные жгутиков. О-агглютинация протекает медленно. При наличии Н-антигена реакция проявляется в образовании крупно-хлопьевидного осадка и протекает значительно быстрее.

Реакция агглютинации недостаточна специфична и чувствительна. Повысить специфичность и чувствительность реакции можно путем разведения исследуемой сыворотки до её титра или половины титра. Титра сыворотки называется то её максимальное разведение, в котором обнаруживается агглютинация антигена. Чем выше титр сыворотки, тем достовернее результаты реакции.

Для постановки РА необходимы следующие ингредиенты:

	Сыворотка à	Это носитель антител. Применяют сыворотки иммунные диагностические, т.е. приготовленные централизованно и содержащие в себе антитела – агглютинины против определенных антигенов; и сыворотки, взятые у больного с неизвестными антителами.
	Антиген à	В качестве антигена применяют: 1-чистую культуру микроорганизмов, полученную от больного (антиген неизвестен); 2-Взвесь микроорганизмов с известным антигеном (это диагностикумы, выпускаемые микробиологической промышленностью)
	Электролитà	В качестве электролита используют физиологический раствор (ИХН)

Дата добавления: 2015-05-10