Получение

Общая характеристика

Сыворотки в биотехнологии

Специфические иммунные сыворотки содержат антитела к определенным видам микроорганизмов.

Сывороточные препараты используют в следующих целях:

- для лечения, так как введение в организм антител обеспечивает быстрое обезвреживание микробов и их токсинов;

- для профилактики, чтобы быстро создать невосприимчивость у человека, контактировавшего с больным или инфицированным материалом;

- микроорганизма выделенного от больного, что позволяет установить вид (тип) микроорганизма.

Введение сыворотки в организм человека создает пассивный иммунитет.

Различают сыворотки антитоксические, которые получают путем иммунизации животных анатоксинами или токсинами микробов, и антимикробные, домученные при многократной иммунизации животных бактериями и эндотоксинами.

Наиболее эффективны антитоксические сыворотки, которые быстро обезвреживают экзотоксины в организме больного. Их применяют для лечения дифтерии, скарлатины, столбняка, ботулизма, газовой гангрены и заболеваний, вызванных стафилококками. Антимикробные сыворотки менее эффективны, поэтому их используют реже.

Лечебные и профилактические гетерологичные сыворотки получают путем иммунизации ослов и лошадей, поскольку эти животные более реактогенны, чем другие, и дают большой выход антител. Кроме того, лошадиный белок анафилоктогенен.

Для получения антитоксических сывороток животных вначале иммунизируют анатоксином, а после создания базисного иммунитета – возрастающими дозами токсина. Антибактериальные сыворотки получают путем введения животным убитых или живых микробов. Из крови животных выделяют плазму, затем из нее удаляют фибрин получают сыворотку.

Забор крови у этих животных производят в период максимального содержания антител, однако для этого необходимо постоянно контролировать кровь по такому показателю, как титр антител.

Антитоксические сыворотки титруются в антитоксических или международных единицах (АЕ или МЕ). За 1 АЕ принимают минимальное количество сыворотки, предохраняющее определенный вид животных от гибели при заражении специально подобранной дозой токсина. Так, 1АЕ антидифтерийной сыворотки – это наименьшее количество сыворотки, которое на протяжении 4 суток предохраняет от смерти морскую свинку массой 250г, инфицированную 100 ДLМ дифтерийного токсина.

Антибактериальные и антивирусные сыворотки не тетрируются и вводятся по клиническим показаниям в миллилитрах. При определении их дозы учитывается тяжесть, день заболевания и возраст больного.

Полученные выше описанным способом сывороточные препараты характеризуются относительно низкой активностью и существенным количеством примесей.

Сыворотки можно получать также из культивируемых на искусственной питательной среде животных клеток. Однако главной проблемой в этом случае является обеспечение стабильного роста животных клеток вследствие их генетической нестабильности, непостоянства генетических экспрессий и старения.

Нередко для лечения и профилактики инфекционных болезней используются гомологичные сыворотки здоровых доноров, переболевших людей или препараты плацентарной крови.

В целях снижения токсичности, уменьшения аллергического действия и концентрации иммуноглобулинов сыворотки освобождают от балластных белков. При этом используют методы фракционирования с помощью спирто-водных смесей при температуре 0° С, ультрацентригугирования, электрофореза, ферментативного гидролиза. Очищенные и концентрированные препараты гамма-глобулиновой фракции сывороточных белков, содерэащие высокие титры антител, называют иммуноглобулинами, а в практике – гамма-глобулинами. Современная технология изготовления человеческого гамма-глобулина гарантирует полную гибель вирусов гепатита.

Заключение

Существующие традиционные вакцины, несмотря на очевидный положительный эффект их широкого применения, обладают рядом недостатков.

К ним относятся: наличие нежелательных биологически активных и балластных компонентов в препаратах, неполноценные иммунологические свойства самих антигенов. Кроме того, существуют заболевания, не вызывающие иммунитета, вакцины против которых вообще отсутствуют и не могут быть сконструированы на основе классических принципов. Все это вызывает необходимость усовершенствования уже существующих вакцин и создания принципиально новых типов вакцин.

Одним из наиболее перспективных направлений в данной области является получение вакцинных препаратов на основе методов генной инженерии.

Последним достижением генной инженерии и биотехнологии стало создание рекомбинантных противовирусных вакцин, содержащих гибридные молекулы нуклеиновых кислот. Данные вакцины обладают целым рядом преимуществ. Они характеризуются отсутствием (или значительным снижением) балластных компонентов, полной безвредностью, низкой стоимостью, которая связана с удешевлением промышленного производства вакцин. Экспрессируемый в клетках вакцинированного животного белок имеет конформацию, близкую к нативной, и обладает высокой антигенной активностью.

Таким образом, рекомбинантные противовирусные вакцины являются новейшим поколением вакцин. Их очевидное преимущество обуславливает широкое применение данного типа вакцин в медицине и ветеринарии для вакцинации населения и сельскохозяйственных животных.

Рисунок1. Схема получения рекомбинантного вируса

+

Новый штамм вируса гриппа, Штамм вируса гриппа PR8,

рекомендованный ВОЗ хорошо реплицирующий на

куриных эмбрионах

Рекомбинантный вирус

Рисунок 2. Схема производства растительной вакцины

PLC контролирует и регистрирует все функции и данные:

Частота вращения мешалки

Уровень аэрации

Температура

Регулиование давления в отводной трубе

Добавление подпитки

Сбор продукта

Стерилизация питательной среды

Стерилизация ферментатора паром

Рисунок 3

Ведущие производители ферментёров - New Braswick, B.Braun, Ghemap, Marubishi, Sartorius, Biotron, Luxun.

Liflus GX (Biotron)

Рисунок 4

Автоклавируемый ферментер (модель LiFlus GX)

А. Особенности

Размер культурального сосуда можно выбрать между несколькими взаимозаменяемыми сосудами с общим объемом 1,5L, 3L, 5L, 7L и 10L. Также можно выбирать тип сосуда – с рубашкой (Double Vessel), который применим в основном для работы с культурами клеток и без рубашки (Single Vessel), который применим для работы с микроорганизмами (бактерии, дрожжи, грибы и т.д).

Эта система может использоваться для периодического, непрерывного режима культивирования, а также для культивирования с подпиткой. Контроллер отображает следующие параметры Temp, pH, DO, скорость мешалки, работу насосов.

BIOSTATв B plus (B.Braun)

Рисунок 5

BIOSTAT® B plus создана для того чтобы стать новым стандартом в области исследовательских ферментеров и биореакторов. Созданы специальные пакеты для микробиологических исследований и культивирования культур клеток. Оборудование готово к использованию «прямо из коробки». Полностью оборудованный готовый к работе аппарат характеризуется лучшими характеристиками по соотношению цена/качество и является логическим выбором для пользователей в учебных, научных и производственных организациях.

Рисунок 6 Рисунок 7

Сосуд для бактериальных культур Сосуд для культивирования культуры клеток

Список литертуры:

1. http://www.remedium.ru/news/ns_read.asp?div=NS_RUSSIA&id=31257

2. Беклемишев А.Б., Савич И.М. Современные подходы к конструированию молекулярных вакцин. - Новосибирск: Наука, 1997, 210 с.

3. Воробьев А.А. и Лебединский В.А. Массовые способы иммунизации, М., 2001 г.

4. Дмитриев Б.А. Проблемы и перспективы создания синтетических вакцин.// Иммунология. - 1986. - №1. - с. 24-29.

5. Жданов В.М., Дзагуров С.Г. и Салтыков Р.А. Вакцины, БМЭ, 3-е изд., т. 3, с. 574, М., 1996.

6. Петров Р.В. и Хаитов Р.М. Искусственные антигены и вакцины, М., 1998.

7. Юров Г. К., Народицкий Б. С., Юров К. П. Конструирование и использование ДНК-вакцин // Ветеринария. - 1998. - №12. - с. 25-27.

Дата добавления: 2015-06-04