Реакция бласттрансформации лимфоцитов

Реакция Овери.

При контакте с аллергеном (по Шульц-Дейлу).

Реакция гладкомышечного органа сенсибилизированного животного

Воспроизведение анафилактического шока у морской свинки.

Морскую свинку за 14 дней до опыта сенсибилизируют подкожным

введением 0,2 мл лошадиной сыворотки. Свинку фиксируют на

операционном столике, в области нижней челюсти анестезируют кожу,

делают разрез и выделяют яремную вену, в которую вводят 2,0 мл

лошадиной сыворотки и отвязывают животное. Наблюдают признаки

анафилактического шока. После остановки дыхания вскрывают

грудную полость и обнаруживают вздутые легкие на фоне сохранения

сердечной деятельности.

Исследование проводят на отрезке изолированной тонкой кишки морской

свинки, сенсибилизированной лошадиной сывороткой. На кишку

накладывают 2 лигатуры, одну закрепляют на крючке, опущенном в сосуд

с раствором Тироде, другую соединяют с миографом для записи

сокращений кишки. В раствор Тироде добавляют сыворотку собаки

(неспецифический аллерген) и отмечают отсутствие сокращений. Затем в

раствор Тироде добавляют 1-2 мл лошадиной сыворотки (специфический

аллерген), при этом отмечается резкое сокращение отрезка кишки.

Морскую свинку наркотизируют, фиксируют, выстригают шерсть на

животе. Пассивную сенсибилизацию кожи осуществляют введением

кроличьей антисыворотки (сыворотка кролика, сенсибилизированного

лошадиной сывороткой) по 0,1 мл в разведениях 1:1, 1:10, 1:100 с

интервалом 1см по средней линии живота. Для контроля отдельно в ту же

область вводят 0,1мл физ. раствора. Через 1-2 часа животному вводят в/в

1мл лошадиной сыворотки вместе с 1мл красителя. Через 10-20 мин

иссекают кожу на животе, на внутренней поверхности отмечают

появление окрашенных пятен разной величины. Измеряют диаметр пятен.

Реакция положительная, если диаметр пятна не менее 5мм.

Бласттрансформация лимфоцитов – проявление реакции иммунной

системы на действие антигена. Это размножение делением лимфоцитов в

результате контакта клетки с антигеном или аллергеном. При первичном

воздействие аллергена интенсивность бласттрансформации незначительна.

Повторное действие аллергена вызывает более выраженную

трансформацию, так как аллерген действует на уже сенсибилизированные

лимфоциты. Свойство сенсибилизированных лимфоцитов давать

выраженную бласттрансформацию используют как тест для определения

аллергена, которым сенсибилизирован организм и позволяют выявить

аллергию.

Для постановки реакции у больного берут 5-10мл крови в пробирку,

содержащую 100-200 ЕД гепарина, перемешивают и помещают на 60мин в

термостат при 37С для осажления эритроцитов. После надосадочный слой

плазмы с лимфоцитами отсасывают в стерильную пробирку и определяют

число лимфоцитов в 1мкл.

Затем взвесь лимфоцитов разводят питательной средой 199 так, чтобы в

1мл содержалось 1-2 млн лимфоцитов. Приготовленную лимфоцитарную

взвесь разливают в стерильные флаконы по 1мл и добавляют 0,1 мл

аллергена. Флаконы помещают в термостат с 37С на 72часа.

Затем готовят мазки, окрашенные по Романовскому, подсчитывают

Количество бластных клеток на 1000 клеток, определяют их % содержание.

Реакция положительная – 4-35% бластных клеток от общего числа клеток.

Дата добавления: 2015-06-04