Методические указания к практической работе

Самостоятельная работа

Тема: «Микроскопический метод диагностики микозов».

Практическая работа №68

Практическая работа №68

Микробиология с микробиологическими исследованиями».

Методическая разработка практического занятия для учащихся отделения «Медико-диагностическое дело» по дисциплине

Тема занятия: «Микроскопический метод диагностики микозов»

Составила преподаватель Якимова Л.М.

Минск 2009г.

Цель занятия: отработать методику микроскопической диагностики микозов

1.Микроскопия музейных препаратов

2.Приготовление препаратов методом «висячей» или «раздавленной» капли, микроскопия приготовленных препаратов.

3. Приготовление мазков и окраска их по Граму

Микроскопический метод является одним из основных методов диагностики микозов, с помощью которого можно проводить экспресс-диагностику микозов и получать результат в течение 1-2 часов (для выделения культур - недели). Следует помнить, что при экспресс-диагностике микозов мазки необходимо окрашивать специальными красителями, так как окраска гематоксилин-эозином часто не выявляет клетки грибов.

В качестве исследуемого материала при микозах используют соскоб кожи и слизистой оболочки, гнойное отделяемое, мокрота, ликвор, моча, фекалии, желудочный сок, фрагменты кожи и ее придатков (ногти, волосы), биоптаты и при летальных исходах образцы пораженных органов. Мазки для выявления грибков в жидких экскретах делают из их осадков, полученных после центрифугирования.

Материалы, содержащие гифомицеты предпочтительнее микроскопировать в неокрашенном состоянии, так как окраска мазков может деформировать тонкую структуру мицелия и находящиеся в нем споры. Поэтому широкое применение нашли методы «висячей» или «раздавленной» капли, которые позволяют выявить структуры грибов в клинических образцах без предварительного окрашивания. Возбудитель отрубевидного лишая при микроскопии представляет собой короткие неправильные, широкие гифы с наличием артро- и хламидоспор (рис.1). Эпидермофитоны представляют нити с короткими боковыми ветвлениями, напоминающими гребешки, среди которых обнаруживают овальные тельца, связанные в пучки («связки бананов») (рис. 2). Трихофитоны формируют мицелий, состоящий из округлых, многогранных полиморфных клеток со спирально скрученными на конце гифами или разветвляющиеся в виде рогов северного оленя (рис. 3). Микроспороны отличаются ракетообразным мицелием и наличием веретен – макроконидий с 5-12 камерами (рис. 4).

При окраске по Граму в мазках из клинического материала грибы представлены грамположительными клетками. Следует помнить, что клетки Cryptococcus neoformans плохо воспринимают красители, что можно использовать как дифференциальный признак при микроскопии окрашенных мазков СМЖ.

Обработка 10% едким кали (КОН) используется в первую очередь для визуализации структур возбудителей во фрагментах кожи и её придатков (ногти, волосы), отделяемом очагов поражения и влагалища. В указанных образцах содержится большое количество клеток, в которых КОН разрушает кератин, оставляя неизмененные клетки грибов. Волосы и чешуйки кожи, зараженные дерматомицетами, погружают на 15-20 минут (иногда на ночь до полного расплавления тканей) в каплю 10-30% КОН, покрывают её покровным стеклом и изучают при малом увеличении микроскопа. Особое внимание обращают на характер поражения волос, по которому дерматомицеты разделяют на эндотриксы, локализующиеся внутри волоса (антропонозные грибки), и эндо-эктотриксы, поражающие также его поверхность (зооантропонозные). Иногда для выявления грибов используется тушь, с помощью которой создается фон, на котором становятся заметны капсулы. Окраска нигрозином или тушью мазков СМЖ позволяет выявить капсулированные клетки Cryptococcus neoformans. Для идентификации последнего можно использовать муцикармин или конго красный. Добавление к исследуемому материалу смеси спирта с глицерином позволяет выявить сферулы у возбудителя кокцидиоидного микоза.

Окраска по Романовскому-Гимзе или Райту мазков крови и костного мозга выявляет дрожжевую форму Histoplasma capsulatum в цитоплазме фагоцитов.

Окраска метенаминовым серебряным по Гомори включает предварительную обработку гистологических препаратов хромовой кислотой с последующим нанесением красителя. При микроскопии клетки грибов окрашиваются в темно-серый или черный цвет.

Окраска по Гридли включает предварительную обработку препарата хроматом лейкофуксина с последующим нанесением фуксинового альдегида и метанилового желтого. При микроскопии клетки грибов окрашиваются в розово-пурпурный цвет на желтом фоне.

При окраске по Мак Манусу препарат обрабатывают перйодной кислотой с последующим нанесением реактива Шиффа. 1,2 гликольные группировки полисахаридов клеточных стенок грибов сначала окисляются перйодной кислотой до альдегидов, реагирующих с сульфитом лейкофуксина реактива Шиффа. При микроскопии клетки грибов окрашиваются в насыщенно-розовый или красный цвет.

В некоторых случаях при дифференциации, например, истинных дрожжей от кандид используют метод Циля–Нильсена.

Метод прямой иммунофлюоресценции предусматривает обнаружение грибковых антигенов с помощью люминесцирующей противогрибковой сыворотки, для чего иммуноглобулины, меченные флюоресцеинами, наносят на гистологический препарат, инкубируют и проводят люминесцентную микроскопию. Обнаружение светящихся объектов свидетельствует о наличии грибов в препарате.

Дата добавления: 2015-07-02