Лабораторная диагностика, характер исследуемого материала

1) серологический метод - в сыворотке, плазме крови с помощью ИФА определяют: антиген вируса (HЕVAg); антитела к вирусу (анти-HЕV IgM, анти-HЕV IgG);

2) молекулярно-генетический метод: ПЦР применяют для определения РНК (HЕV RNA) вируса в кале и в сыворотках крови больных в острой фазе инфекции.
Дифференциация проводится с учетом маркеров других возбудителей вирусных гепатитов.

7. Особенности вирусологического метода диагностики (культивирование, индикация, идентификация вируса).

В ирусологический метод не применяют.

8. Противовирусный иммунитет

После перенесенного заболевания стойкий.

9. Специфическая профилактика

Неспецифическая профилактика направлена на улучшение санитарно-гигиенических условий и снабжение качественной питьевой водой. Созданы неживые цельновирионные вакцины, разрабатываются рекомбинантные и живые вакцины.

10. Этиотропное лечение

Симптоматическое. Беременным рекомендуется введение спецефического иммуноглобулина.

ВИЧ-ИНФЕКЦИЯ

1. Таксономия, классификация

Вич-инфекция - антропонозная ретровирусная инфекция с мед­ленным развитием, длительным течением и разнообразными клини­ческими проявлениями, которая завершается развитием синдрома приобретенного иммунодефицита - СПИД и гибелью больного. Международное наименование СПИД – AIDS (англ. Acquired Immunodeficiency Syndrome).

Возбудитель инфекции - ВИЧ или HIV(англ.: human immunodeficiency virus - HIV-1, HIV-2) относится к семейству Retroviridae, подсемей­ству Lentivirinae, роду Lentivirus.

Ретровирусы - сложные РНК-геномные вирусы, которые харак­теризуются своей способностью передавать информацию с РНК на ДНК. На геномной РНК вируса с помощью вирусспецифического фер­мента обратной транскриптазы (ревертазы) синтезируется комплемен­тарная нить ДНК, которая после преобразования в двунитевую форму встраивается в геном клетки хозяина в виде ДНК-провируса, осуще­ствляя интегративную (интегральную) инфекцию.

Известны два типа вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2, отличающиеся по антигенным и структурным свойствам.

ВИЧ-1 имеет пандемическое распространение и является основ­ным возбудителем ВИЧ-инфекции, поэтому далее разбираются свой­ства этого вируса, называемого просто ВИЧ.

ВИЧ-2 эндемичен для Западной и Центральной Африки, в других странах был выявлен в единичных случаях. Вызываемая этим вирусом ВИЧ-инфекция имеет более длительное и доброкачественное течение.

2.Морфология, размеры, особенности генома

ВИЧ является РНК-геномным ретровирусом, имеет сферическую форму и диаметр 100-120 нм. Внешняя оболочка вириона - суперкапсид - представляет собой двойной липидный слой клеточного (мембранного) происхождения, с которым ассоциированы два гликопротеина, образующие шипики - gр41 (белок слияния) и gр 120 (прикрепительный белок). Субъединицы трансмембранного гликопро­теина gр41 погружены в липидный слой, к стержням которых снару­жи присоединены гликопротеины gр120, выступающие на поверхности вириона в виде булавовидных шипов (рис. 27).

Под внешней оболочкой вируса находится матриксный слой. Он состоит из протеина р17 и имеет форму двенадцатигранника.

Сердцевина вируса «кор» - это нуклеокапсид с кубическим ти­пом симметрии. Он состоит из капсидного белка р24 и имеет форму полого конуса. Внутри конуса расположены две идентичные нити плюс-РНК, представляющие диплоидный геном ВИЧ, три энзима - обратная транскриптаза, протеаза (рибонуклеаза), интеграза - и бел­ки, связывающие эти структуры воедино.

Рис. 27 Схема ВИЧ

Геном ВИЧ содержит 9 генов — 3 структурных (gag, роl, еnv) и 6 регуляторных (tat, rev, vif, nef, vpr, vpu). На обоих концах нитей РНК расположены длинные концевые повторы - LTR. (Long terminal repeat).

Структурные гены кодируют структурные белки, входящие в со­став вириона:

- gag - ген (group specific antigens) - кодирует капсидный, матрикс­ный и нуклеокапсидный белки;

- роl-ген (polymerase) - отвечает за синтез обратной транскриптазы (ревертазы), РНК-азы, интегразы;

- env-ген (envelope) — кодирует оболочечные гликопротеины: трансмембранный gр41 и поверхностный gр120.

Регуляторные гены:

-tat-ген (transactivator of transcription) - положительный регулятор, его функции: увеличивает активность структурных и регулятор­ных генов, повышает скорость репликации вируса в Т-лимфоцитах до 1000 раз, кодирует синтез белка-трансактиватора;

- rev-ген (regulator of expression of virus proteins) — активирует экс­прессию структурных генов и репрессирует регуляторные гены, обеспечивая умеренную репродукцию вируса, отвечает за пере­ход от скрытой (интегративной) инфекции к активной форме раз­множения вирусов;

- nef-ген (negative regulatory factor) - негативный регулятор, угне­тает активность всех генов,

способен замедлять или прекращать размножение ВИЧ в клетках, функционирует при участии LTR., обеспечивающих равновесие между вирусом и организмом;

- vif- ген (virion infectivity factor) - кодирует белок р23, который спо­собствует эффективному заражению клеток, не имеющих СD4-рецепторов (В-лимфоцитов, клеток ЦНС и др.), а также необходим для созревания вирионов.

- функции vpr- и vpu- генов еще недостаточно изучены, среди пред­полагаемых функций vpr-гена - активация транскрипции, а vpu-ген участвует в эффективном почковании вирусов.

Взаимодействие между регуляторными генами tat, rev, nef и их совместное действие на структурные гены с обратной связью опреде­ляет уровень размножения ВИЧ на разных стадиях заболевания. Огра­ниченная репликация вируса позволяет ему длительно воспроизводиться, не убивая зараженные клетки. Подобная форма ре­гуляции может быть адаптивным признаком ретровирусов, хозяевами которых являются виды с длительным сроком жизни, например чело­век, приматы и др.

Антигены. Все структурные и регуляторные белки ВИЧ облада­ют антигенными свойствами, выраженными в большей или меньшей степени. Более сильными антигенами являются белки, кодируемые структурными генами, а также nef- протеин.

Антитела против различных антигенных эпитопов выявляются с неодинаковой частотой. Практически у всех ВИЧ-инфицированных людей обнаруживают антитела к гликопротеину gр41.

Различные штаммы ВИЧ серологически неоднородны, однако разработка классификации по антигенным свойствам с выделением различных сероваров встречает большие трудности.

Ретровирусы, в том числе ВИЧ, обладают исключительно высо­кой генетической изменчивостью, значительно превышающей измен­чивость других РНК-геномных вирусов. Это связано с многоступенчатой репликацией их генома, во время которой накапли­ваются ошибки, приводящие к мутациям в геномной РНК. Выявлено, что в процессе одного цикла репродукции возникает коло 10 мутаций. Появившиеся варианты с измененным генотипом существуют в орга­низме одновременно и сменяют друг друга. Они могут существенно отличаться по антигенным свойствам, тканевому тропизму, вирулент­ности и др., что позволяет им уклоняться от иммунологического надзо­ра и создает условия для длительного выживания ВИЧ в организме.

По генетическим отличиям (разнице в аминокислотном составе белков) выделены три группы ВИЧ: М, N, О. Преобладающей являет­ся группа М (mayor), которая, в свою очередь, подразделяется на 10 субтипов, обозначаемых латинскими буквами А, В, С... и т.д. Между этими субтипами могут возникнуть рекомбинанты, образующие до­полнительные субтипы, например АВ и др.

Среди штаммов ВИЧ, выделяемых в России, в настоящее время преобладают вирусы субтипа А, встречаются также возбудители суб­типов В и АВ.

3. Этапы репродукции

Вирус (1) связывается гликопротеином gp120 с рецептором CD4 T-хелперов и клеток макрофагального происхождения (макрофаги дендритные и микроглиальные клетки). Второй рецептор - трансмембранный G-белок (хемокиновый рецептор слияния - фузин, CXCR4) на T-клетках и CCR5 на макрофагах. ВИЧ входит в клетку путем слияния оболочки с плазматической мембраной клетки. Проникший в цитоплазму клетки вирион высвобождает геномную РНК. С помощью обратной транскриптазы на матрице РНК происходит синтез комплементарной ДНК (кДНК), которая (2,3) затем интегрирует с ядерной ДНК клетки. Рекомбинантная ДНК - провирус (4) служит основой синтеза геномной РНК вируса и иРНК, которые обеспечивают синтез компонентов вируса и сборку вирионов. Вирионы выходят из клетки путем почкования (5): сердцевина вируса "одевается " в измененную плазматическую мембрану клетки (рис. 28).

Рис. 28 Этапы репродукции ВИЧ

Основными клетками-мишенями для ВИЧ являют­ся различные СD4⁺ клетки, имеющие дифференцировочные рецепто­ры СD4 (Cell differention antigen). Это прежде всего Т-хелперы, около 40% моноцитов крови, 5% В-лимфоцитов, а также некоторые макро­фаги тканей, дендритные клетки, микроглиальные клетки и другие. Выявлена также способность ВИЧ поражать клетки, не имеющие ре­цепторов СD4 - эпителиальные, эндотелиальные и другие.

Различают следующие основные этапы взаимодействия ВИЧ с клеткой-мишенью.

Адсорбция вируса на клетке, несущей рецепторы СD4, путем присоединения поверхностных гликопротеинов gр120 к этим рецеп­торам (при участии гликопротеина gр41, способствующего проникно­вению вируса в клетку). Вирус проникает в клетку путем эндоцитоза или при слиянии вирусной и клеточной мембран.

Оказавшись в цитоплазме клетки, сердцевина вируса депротеинизируется, высвобождается и начинает функционировать геномная РНК вируса.

На матрице геномной плюс-РНК с помощью вирусной обратной транскриптазы (РНК-зависимой ДНК-полимеразы) синтезируется ком­плементарная нить ДНК. Затем нить вирусной плюс-РНК разрушает­ся рибонуклеазой и на ее место встраивается вторая нить ДНК, образуя двунитчатую молекулу ДНК. Эта структура транспортируется в ядро клетки и с участием интегразы встраивается в геном клетки — хозяина. Интегрированный геном-провирус вызывает состояние вирусной интегративной инфекции на протяжении длительного времени, вплоть до гибели клетки, или переходит в дочерние клетки при их делении.

В большем или меньшем количестве инфицированных клеток происходит переход к продуктивной инфекции. На этот процесс влия­ют многие экзогенные и эндогенные факторы, его запускают LTR, индуцирующие транскрипцию вирусных генов. На ДНК-провирусе образуются копии вирусной плюс-РНК, часть из них - будущие ге­номные РНК, другие - выполняют функции и-РНК, осуществляя транс­ляцию вирусных белков, как регуляторных, так и структурных.

Сборка вириона начинается с формирования сердцевины вируса, состоящей из двух идентичных нитей геномной РНК с ассоциирован­ными ферментами и капсида. Вирус приобретает суперкапсид при отпочковывании вируса от клетки через участок модифицированной клеточной мембраны, в которую встроен трансмембранный gр41 и на­ружу выступает gр 120, изнутри к мембране прилегает матриксный слой.

Часто цикл репродукции заканчивается гибелью клетки, его про­должительность 1-2 суток.

Резистентность. ВИЧ малоустойчив к воздействиям многих химичеуких и физических факторов. Он быстро гибнет при действии обычных дезинфектантов, при нагревании до 60°С инактивируется за 30 минут, при кипячении мгновенно, менее чувствителен к действию солнечного света, УФ-лучей, радиации.

ВИЧ хорошо переносит высушивание, сохраняясь в высохшей крови до двух недель. В донорской крови вирус остается жизнеспо­собным в течение нескольких лет.

4. Эпидемиология

Источник и резервуар ВИЧ-инфекции - человек на всех стадиях заболевания. Наибольшая концентрация ВИЧ наблюдается в крови, сперме, секретах цервикального канала и влагалища. Именно через эти биологические жидкости происходит инфицирование. Считается, что инфицирующая доза составляет около 10 тысяч вирионов. ВИЧ обнаружен также в слезах, слюне, поте, ликворе, моче и грудном молоке, но в незначительном количестве, поэтому эти биологичес­кие субстраты не представляют опасности для заражения. Исклю­чение составляет молоко, т.к. при грудном вскармливании происходит ежедневное внедрение вируса в организм ребенка в те­чение длительного времени.

Способы передачи ВИЧ-инфекции:

1. При половых контактах - гомосексуальных и гетеросексуальных;

2. Парэнтерально: через кровь при переливании крови, при введении препаратов крови, при трансплантации, через загрязненные шприцы и другие инструменты и т.п.;

3. Вертикально - от инфицированной матери - ребенку внутриут­робно, во время родов, при грудном вскармливании. При всех способах передачи главную опасность представляет инфицированная кровь, в СD4⁺-клетках которой (в Т4-лимфоцитах и других клетках) происходит основное накопление вирусов.

Наиболее распространенный способ передачи - при половых кон­тактах, поэтому ВИЧ-инфекцию относят к ИППП (инфекции, переда­ющиеся половым путем).

Выделяют несколько групп риска - контингентов людей, для ко­торых заражение ВИЧ наиболее вероятно.

Это гомосексуалисты, проститутки, инъекционные наркоманы, больные гемофилией и другими заболеваниями крови, которым тре­буются частые переливания крови и введение концентрированных препаратов крови. Сюда же можно отнести больных венерическими заболеваниями, для которых характерны поражения слизистых гени­талий, сниженная сопротивляемость организма, беспорядочные поло­вые связи, что повышает риск ВИЧ-инфицирования. Представители этих групп, будучи инфицированными, способствуют распростране­нию ВИЧ-инфекции среди обычного населения.

Также к группе риска относятся дети, рожденные ВИЧ-инфици­рованными матерями. Вероятность их заражения составляет 40-50% в развивающихся странах и 25-30% - в цивилизованных.

Возможность ВИЧ-инфицирования существует и для медицин­ских работников — врачей и медицинских сестер — которым по роду своей деятельности приходится контактировать с кровью.

Дата добавления: 2015-06-27