Биологические методы определения сердечных гликозидов

Качественное определение

Несмотря на отсутствие строго специфических реакций, применение следующего комплекса проб позволяет сделать заключение о наличии сердечных гликозидов. Качественные реакции проводятся либо с индивидуальными веществами, либо с очищенным извлечением из растительного сырья. Для этого несколько капель извлечения упаривают досуха на часовом стекле или в выпарительной чашке, а сухой остаток растворяют в нужном растворителе.

Все реакции на сердечные гликозиды можно разделить на 3 группы:

1) реакции на углеводную часть молекулы (2-дезоксисахара) (реакция Келлер — Килиани);

2) реакции на стероидное ядро (реакция Либермана — Бурхарда; реакция Розенгейма и др.;

3) реакции на лактонное ненасыщенное кольцо.

Для установления наличия пятичленного лактонного кольца проводятся реакции: Легаля (с нитропруссидом натрия); Раймонда (с 3,5-динитробелзолом); Кедде (с 3,5-динитробензойной кислотой); Балье (с пикриновой кислотой). Реакции проводятся в щелочной среде. На шестичленное лактонное кольцо не найдены достаточно специфические реактивы. Для обнаружения буфадиенолидов на хроматограммах используют 20%-ный раствор треххлористой сурьмы в хлороформе.

Нормативно-техническая документация на лекарственное растительное сырье, содержащее сердечные гликозиды, наряду с физико-химическими методами количественного определения требует обязательной стандартизации сырья биологическими методами.

По требованиям ГФ X биологическая стандартизация сердечный гликозидов проводится на лягушках, кошках и голубях. Активность оценивают по сравнению со стандартным кристаллическим препаратом и выражают в единицах действия (лягушачьих, кошачьих и голубиных).

Одна лягушачья единица действия (ЛЕД) соответствует наименьшей дозе стандартного препарата вызывающей систолическую остановку сердца стандартной лягушки (лягушка-самец массой 20—33 г) в течение 1 ч, если испытывают сырье и препараты наперстянки, ландыша и горицвета, или 2 ч, если испытывают сырье и препараты строфанта, желтушника и олеандра. Под одной кошачьей или голубиной единицей действия (1 КЕД или 1 ГЕД) Подразумевают дозу стандартного препарата из расчета на 1 кг массы животного.

В НТД на лекарственное растительное сырье, содержащее сердечные гликозиды, обязательно указывается валор. Валор сырья — что количество единиц действия в 1 г сырья.

Наиболее часто используется стандартизация на лягушках. К основным недочетам этого метода относятся следующие:

1) исследования проводятся на холоднокровных животных, генетически далеко отстоящих от человека;

2) определяется смертельная доза, тогда как для клиники важно правильно определить терапевтические дозы;

3) лягушки используемых видов распространены не во всех районах нашей страны и не во всех странах;

4) малая точность метода (± 20—25 %) ввиду резко изменяющейся чувствительности лягушек в зависимости от времени года и других условий.

Метод биологической стандартизации на кошках, принятый ГФ X, более точен (± 5—10 %), но также достаточно трудоемок.

Контрольные вопросы

1. Определение сердечных гликозидов.

2. Классификации сердечных гликозидов. Укажите, нa чем они основаны, и приведите примеры формул к каждой группе.

3. Характеристика сердечных гликозидов группы наперстянки.

4. Характеристика сердечных гликозидов группы строфанта.

5. Характеристика сахарного компонента.

6. Зависимость между химическим составом и биологическими свойствами сердечных гликозидов.

7. Семейства, богатые сердечными гликозидами.

8. Условия сушки растительного сырья, содержащего сердечные гликозида. Физико-химические свойства сердечных гликозидов.

9. Реакции на сахарную часть молекулы сердечного гликозида.

10. Реакции на стероидный цикл,

11. Реакции на лактонное ненасыщенное кольцо.

12. Методы количественного определения сердечных гликозидов.

13. Биологические методы определения сердечных гликозидов.

14. Определение 1 ЛЕД.

15. Определение валор.

16. Основные этапы выделения сердечных гликозидов из растительного сырья.

Дата добавления: 2014-01-03